環(huán)丙沙星在TNBS小鼠腸炎模型中的預(yù)防作用及結(jié)腸黏膜TLR4受體表達(dá)的變化.pdf

1、背景和目的：腸道的免疫耐受(tolerance)是腸道對無害的共生菌群及其產(chǎn)物維持低反應(yīng)狀態(tài)，參與了共生菌與腸道黏膜間維持“穩(wěn)態(tài)”的重要機(jī)制。缺乏病原菌感染的腸道過強(qiáng)炎癥反應(yīng)對于機(jī)體是有害的，并可以造成腸道炎癥。腸上皮細(xì)胞(intestinalepithelialcell，IEC)低表達(dá)Toll樣受體4(Toil-like-receptor4，TLR4)是建立“耐受”的分子免疫機(jī)制之一。臨床及動物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：IBD患者(或動物模型)腸

2、道黏膜TLR4表達(dá)增加。環(huán)丙沙星對主要累及結(jié)腸的克羅恩氏病(Crohn'sdisease，CD)有治療作用，并能預(yù)防CD手術(shù)后復(fù)發(fā)。本研究旨在：(1)進(jìn)一步研究細(xì)菌感染在三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)腸炎中的作用(2)評價環(huán)丙沙星在腸炎小鼠模型中的預(yù)防作用(3)研究TNBS誘導(dǎo)腸炎小鼠腸道上皮TLR4表達(dá)的變化，并探討TLR4在腸炎模型中的作用。 方法：炎癥性腸病小鼠動物模型制作采用TNBS灌腸誘導(dǎo)法。實(shí)驗(yàn)動物共分3組，分別為正常

3、對照組(10只)，TNBS腸炎組(20只)及環(huán)丙沙星預(yù)防處理組(10只)。所有動物均以下列參數(shù)評價，即大體評價(體重、活動度)，HE染色，遠(yuǎn)段結(jié)腸內(nèi)容物細(xì)菌培養(yǎng)，結(jié)腸黏膜TLR4表達(dá)(免疫組化、RT-PCR)。 結(jié)果：TNBS誘導(dǎo)的小鼠腸炎模型中，體重及活動度明顯下降。光鏡下TNBS腸炎組：杯狀細(xì)胞(gobletcell)消失，黏膜壞死、水腫，多核中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤至黏膜層、黏膜下層甚至浸潤到肌層。而正常組、環(huán)丙沙星組小鼠

4、結(jié)腸黏膜無(或輕微)炎癥。 實(shí)驗(yàn)中使用ELISA方法測量小鼠血清TNF-(x。3組中僅TNBS組與對照組血清TNF-α有顯著差異，環(huán)丙沙星預(yù)防組較TNBS組減少，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。遠(yuǎn)段結(jié)腸內(nèi)容物細(xì)菌培養(yǎng)以大腸桿菌為主，環(huán)丙沙星組較TNBS腸炎組明顯減少。正常小鼠結(jié)腸黏膜少量表達(dá)TLR4，TNBS灌腸小鼠結(jié)腸腸黏膜'TLR4表達(dá)顯著增多，環(huán)丙沙星預(yù)防組TLR4表達(dá)明顯少于TNBS組。結(jié)論：一．細(xì)菌感染在IBD發(fā)病機(jī)制中有重要作用。二

5、．預(yù)防性應(yīng)用窄譜抗生素(環(huán)丙沙星)有預(yù)防TNBS誘導(dǎo)腸炎的作用，該組小鼠體重、活動度和病理(HE染色評分)均顯著改善。三．TNBS腸炎組中，TLR4受體在蛋白水平(免疫組化)和mRNA水平(RT-PCR)均上調(diào)表達(dá)。 四．預(yù)防性應(yīng)用環(huán)丙沙星后，模型小鼠腸道上皮TLR4受體未被充分上調(diào)和激活，保持在相對低水平表達(dá)。腸道菌群多寡與腸道上皮TLR4表達(dá)一致，提示兩者可能有相關(guān)性。 五．預(yù)防使用環(huán)丙沙星減少腸腔內(nèi)TLR4配體——