TLR4信號(hào)通路在老齡大鼠術(shù)后認(rèn)知功能下降中的作用研究.pdf

1、目的:通過比較老齡大鼠麻醉和手術(shù)前后行為學(xué)的變化，探討麻醉和手術(shù)對術(shù)后認(rèn)知功能的影響;檢測麻醉和手術(shù)前后老齡大鼠海馬區(qū)TLR4及其下游關(guān)鍵因子的表達(dá)，探討TLR4信號(hào)通路在麻醉手術(shù)后老齡大鼠術(shù)后認(rèn)知功能下降的發(fā)生機(jī)制中的作用。
　　方法:(1)22-23月齡雌性SD大鼠70只，隨機(jī)分為對照組(C組)，手術(shù)組(S1、S3、S7，即麻醉術(shù)后1、3、7天組，n=10)，麻醉組（A1、A3、A7，即麻醉后1、3、7天組，n=10）。造模前

2、進(jìn)行6天Morris水迷宮重復(fù)空間記憶訓(xùn)練。在第7天，對手術(shù)組使用3％異氟烷誘導(dǎo)后行氣管插管術(shù)，以2％異氟烷維持麻醉2小時(shí)，行脾臟切除術(shù);對麻醉組僅給予3％異氟烷誘導(dǎo)后氣管插管術(shù)及2％異氟烷維持麻醉2小時(shí);對C組給予空氧混合氣體吸入2小時(shí)。造模過程中監(jiān)測各項(xiàng)生命體征。在手術(shù)/麻醉后第1、3、7天分別對S1和A1組、S3和A3組、S7和A7組進(jìn)行反向測試，將平臺(tái)移至對側(cè)，比較各組與對照組潛伏時(shí)間、位移和游泳速度的差異。行為學(xué)測試完畢后立即

3、處死，每組隨即選5只取海馬液氮保存，其余5只灌注固定后取大腦疊氮化鈉保存?zhèn)溆谩?br>　　(2)應(yīng)用免疫組化、免疫熒光雙標(biāo)、western blot及RT-PCR等方法檢測麻醉手術(shù)前后大鼠海馬區(qū)CA3區(qū)TLR4及其下游通路主要因子MyD88、TRIF、NF-κB及炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6等的表達(dá)，尼氏染色法觀察海馬區(qū)神經(jīng)元的數(shù)量和形態(tài)改變。
　　結(jié)果:(1)反向測試的結(jié)果顯示，手術(shù)組的潛伏時(shí)間與位移明顯增加，以S1

4、組表現(xiàn)最為顯著，這種增加在S3組雖然有所下降，但與對照組相比仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。麻醉組也表現(xiàn)為潛伏時(shí)間與位移增加，但程度與持續(xù)時(shí)間均不及手術(shù)組，僅A1組的潛伏時(shí)間和位移與對照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。各組的游泳速度無明顯差異。(2)免疫組化結(jié)果顯示，手術(shù)后海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞被激活，激活形態(tài)的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量S1組最多。麻醉組海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞也被激活，但數(shù)量少于對應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的手術(shù)組。免疫熒光顯示TLR4在海馬CA3區(qū)主要表達(dá)于小膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞表面。

5、手術(shù)后，TLR4在此兩種細(xì)胞上均呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，在S1組出現(xiàn)表達(dá)高峰，此后逐漸下調(diào)至正常水平;麻醉后TLR4表達(dá)亦上調(diào)，但在對應(yīng)時(shí)間點(diǎn)均低于手術(shù)組。Westernblot和RT-PCR結(jié)果顯示，海馬CA3區(qū)TLR4、MyD88、TRIF、NF-κB及炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6等在手術(shù)及麻醉后都呈現(xiàn)表達(dá)增高的趨勢，其高峰都出現(xiàn)在S1組和A1組，但麻醉組整體表達(dá)都明顯弱于手術(shù)組。尼氏染色發(fā)現(xiàn)麻醉和手術(shù)前后海馬CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)量