電針對(duì)睡眠剝奪大鼠脾臟TLR4信號(hào)通路及miR-146a表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　通過建立Wistar大鼠睡眠剝奪（Sleep Deprivation，SD）模型，從形態(tài)學(xué)變化、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)行為學(xué)分析等方面評(píng)價(jià)電針神庭、百會(huì)穴的抗SD作用，并從免疫器官臟器指數(shù)、炎性細(xì)胞因子IL-1，IL-6和TNF-α等方面探討睡眠剝奪與機(jī)體免疫系統(tǒng)間的關(guān)系，以及探究 miR146a對(duì) TLR4信號(hào)通路中關(guān)鍵基因TLR4、NF-κβ、IRAK1、TRAF6的調(diào)控作用并對(duì)睡眠剝奪后機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的相互影響，為臨床使用電

2、針神庭、百會(huì)穴的方法改善睡眠障礙提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　將32只SPF級(jí)Wistar雄性大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法平均分成4組，包括對(duì)照組、模型組、安定組、電針組。實(shí)驗(yàn)第一、二天除對(duì)照組外其余各組大鼠均通過腹腔注射PCPA建立睡眠剝奪大鼠模型；實(shí)驗(yàn)第三至七天，安定組連續(xù)五天腹腔注射安定注射液，電針組連續(xù)五天電針神庭、百會(huì)穴20分鐘，模型組不做任何干預(yù)，每組均作形態(tài)學(xué)觀察。實(shí)驗(yàn)第八天，將四組大鼠分別進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，測(cè)試其水平、垂

3、直得分和中央格停留的時(shí)間，隨后麻醉下取材并處死大鼠，收集脾臟作為樣本，采用Real-time qPCR技術(shù)檢測(cè)IL-1、IL-6、TNF-α和miR146a及TLR4信號(hào)通路中關(guān)鍵因子TLR4、NF-κβ、IRAK1、TRAF6的mRNA表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠腹腔注射PCPA后，正常的睡眠-覺醒周期紊亂，甚至消失，全天表現(xiàn)出煩躁興奮狀態(tài)，經(jīng)過電針和安定干預(yù)后睡眠-覺醒周期逐漸恢復(fù)正常，白天安靜喜臥，性情溫順。

4、
　　2.經(jīng)睡眠剝奪后，模型組、安定組和電針組大鼠體重較對(duì)照組大鼠相比有明顯減輕，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；經(jīng)干預(yù)治療后，安定組和電針組大鼠體重逐漸回升，差異與模型組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　3.曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，模型組大鼠水平、垂直得分和中央格停留時(shí)間明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，安定組和電針組水平、垂直得分和中央格停留時(shí)間明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.

5、05）。
　　4.與對(duì)照組相比，模型組大鼠胸腺、脾臟指數(shù)顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組相比，安定組和電針組胸腺、脾臟指數(shù)下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。
　　5.與對(duì)照組相比，模型組IL-1和TNF-α含量顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），IL-6無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；與模型組相比，安定組和電針組IL-1和TNF-α含量顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），IL-

6、6無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　6.與對(duì)照組相比，模型組大鼠脾臟TLR4信號(hào)通路中關(guān)鍵因子TLR4、NF-κβ、IRAK1、TRAF6的mRNA表達(dá)量明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組相比，安定組和電針組大鼠脾臟中各關(guān)鍵因子表達(dá)量顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　7.與對(duì)照組相比，模型組大鼠脾臟miR146a的mRNA表達(dá)量升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，安

7、定組大鼠脾臟miR146a的mRNA表達(dá)量顯著降低，而電針組大鼠脾臟miR146a的mRNA表達(dá)量明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、經(jīng)睡眠剝奪后的大鼠，在形態(tài)學(xué)和行為學(xué)方面均發(fā)生異常改變，電針可以改善這些變化，起到良好的改善睡眠剝奪的作用。
　　2、電針可有效調(diào)控因睡眠剝奪而導(dǎo)致升高的大鼠免疫臟器指數(shù)和體內(nèi)細(xì)胞因子水平，說明電針治療改善睡眠剝奪癥與調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能有關(guān)。
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