TLR4信號(hào)通路相關(guān)細(xì)胞因子在大鼠阻塞性黃疸致肝損傷及干預(yù)中的差異表達(dá).pdf

1、研究目的：本課題擬以SD大鼠為研究對(duì)象，采用中等強(qiáng)度有氧運(yùn)動(dòng)聯(lián)合骨髓干細(xì)胞移植或中藥大柴胡湯干預(yù)手段，探討TLR4信號(hào)通路及相關(guān)細(xì)胞因子在大鼠阻塞性黃疸致重癥肝損傷和干預(yù)中的差異表達(dá)及可能分子機(jī)制。
　　 研究方法：成年健康雄性SD大鼠40只，體重180-250g。隨機(jī)分為正常組(N組)，肝損傷模型組(OJ組)，骨髓干細(xì)胞聯(lián)合運(yùn)動(dòng)組(BMSCs+E組)組，中藥聯(lián)合運(yùn)動(dòng)組(MBD+E組)，每組10只。OJ組、BMSCs+E組、MB

2、D+E組大鼠均采用膽總管短期懸掛法構(gòu)建阻塞性黃疸肝損傷模型。BMSCs+E組門靜脈輸入0.5ml骨髓干細(xì)胞，MBD+E組于膽總管結(jié)扎術(shù)后三天進(jìn)行大柴胡湯灌胃，灌胃12周，兩干預(yù)組于術(shù)后3天剪斷膽總管固定線后開始進(jìn)行12周的中等強(qiáng)度跑臺(tái)訓(xùn)練。12周后大鼠禁食過夜，隨后分離出肝組織并取材，對(duì)各組大鼠肝臟組織損傷情況進(jìn)行顯微結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)觀察；免疫組化法檢測肝組織Toll樣受體4(TLR4)及髓樣分化因子88(MyD88)蛋白表達(dá)水平；RT-PC

3、R法檢測肝組織腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)mRNA表達(dá)水平；生物化學(xué)分析法檢測血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和總膽紅素(STB)含量。
　　 研究結(jié)果：①HE染色顯示：N組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，無變形及壞死；OJ組大鼠肝細(xì)胞損傷明顯，肝小葉內(nèi)可見多種形態(tài)的壞死灶，其內(nèi)可見少量纖維細(xì)胞增生；MBD+E組可見部分肝小葉內(nèi)可見灶狀及小片狀壞死；BMSCs+E組無明顯組織壞死，

4、肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，肝索排列較整齊。②血清學(xué)結(jié)果：BMSCs+E組ALT、AST、TBIL水平較OJ組顯著降低(P<0.01)，MBD+E組ALT、TBIL水平也顯著下降(P<0.05)。③免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：MBD+E組、BMSCs+E組大鼠肝組織TLR4、MyD88表達(dá)均顯著低于OJ組(P<0.01)。④RT-PCR結(jié)果顯示：與OJ組比較，MBD+E組、BMSCs+E組大鼠肝組織IL-6、TNF-a表達(dá)降低(P<0.01)，而