CD14、TLR4基因表達(dá)及炎性細(xì)胞因子在內(nèi)毒素致肝炎重型化中的機(jī)制研究.pdf

1、背景目的 腸源性內(nèi)毒素血癥(IETM)在肝炎重型化發(fā)生與發(fā)展起關(guān)鍵作用。目前認(rèn)為IETM主要是通過激活單核巨嗜細(xì)胞系統(tǒng)誘發(fā)失控性炎癥反應(yīng)，釋放大量炎性細(xì)胞因子(TNFa、IL-1β、IL-6等)導(dǎo)致肝損害加重，甚至肝衰竭。在肝炎重型化過程中，內(nèi)毒素如何激活單核細(xì)胞誘導(dǎo)失控性炎癥反應(yīng)，體內(nèi)單核巨嗜細(xì)胞表面內(nèi)毒素受體及其引發(fā)胞內(nèi)下游信號(hào)分子的表達(dá)情況在慢性重型肝炎中的作用尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)力求闡明腸源性內(nèi)毒素血癥通過“CD14、TLR4”

2、為核心的信號(hào)傳導(dǎo)通路并誘導(dǎo)失控性炎癥反應(yīng)最終導(dǎo)致肝炎重型化的機(jī)制；同時(shí)對(duì)其與以“TNFa”為核心的致炎細(xì)胞因子的相關(guān)性作一更明確的探討。 方法 采用流式細(xì)胞術(shù)和逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)40例慢性重型乙型肝炎患者、20例慢性乙型肝炎患者和20例正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞膜結(jié)合CD14(mCD14)表達(dá)以及CD14mRNA、TLR4 mRNA表達(dá)水平，應(yīng)用動(dòng)態(tài)濁度法測(cè)定血漿內(nèi)毒素水平和固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA

3、)檢測(cè)血清TNFa、IL-1β、IL-6水平。 結(jié)果 慢性重型乙型肝炎組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞mCD14表達(dá)水平為(74.23±12.28)，明顯高于慢性乙型肝炎患者(63.62±11.82 p<0.01)和對(duì)照組(60.30±7.21 p<0.01)。慢性重型乙型肝炎患者內(nèi)毒素為(1.873±1.605)，均高于慢性乙肝組(0.106±0.113、P<0.01)和健康對(duì)照組(0.025±0.028、P<0.01)，慢性重型乙肝

4、組患者外周血TNFa、IL-1、IL-6表達(dá)水平分別為(19.78±9.25、0.956±0.156、68.34±48.30)明顯高于慢性乙型肝炎組(7.266.52、0.189±0.015、19.28±4.65、P<0.01)和對(duì)照組(4.15±4.06、0.148±0.012、12.01±3.88 P<0.01)。此外，相關(guān)分析顯示在慢性乙型重型肝炎內(nèi)毒素水平與mCD14表達(dá)水平在內(nèi)毒素持續(xù)時(shí)間上有明顯的相關(guān)性(r=0.865、P<

5、0.05)。早期合并內(nèi)毒素血癥慢性重型乙型患者mCDl4、CDl4mRNA、TLR4mRNA表達(dá)較慢性乙型肝炎組有明顯上調(diào)。慢性重型乙型肝炎CDl4mRNA、TLR4 mRNA表達(dá)分別為(2.92±O.67、1.86±O.45，P

6、明顯的相關(guān)性。內(nèi)毒素濃度與TNFa、IL-1的水平與慢性重型乙型肝炎患者預(yù)后存在明顯的相關(guān)性。結(jié)論內(nèi)毒素血癥是肝炎重型化中的重要誘因之一；慢性重型化過程中內(nèi)毒素通過“CDl4”和“TLR4”為核心內(nèi)毒素受體及其信號(hào)傳導(dǎo)的增強(qiáng)并激發(fā)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)分泌以“TNFa”為核心的致炎細(xì)胞因子導(dǎo)致慢性乙型肝炎肝細(xì)胞受損加劇，最終導(dǎo)致肝炎重型化的發(fā)生。慢性重型肝炎合并內(nèi)毒素血癥的早期患者mCDl4、CDl4mRNA、TLR4mRNA的表達(dá)與內(nèi)毒素濃