肺組織CD14、TLR4受體易感性在老年大鼠多器官功能障礙綜合征中作用機(jī)制研究.pdf

1、老年多器官功能障礙綜合征(MODSE)往往繼發(fā)于肺部感染且以肺損傷出現(xiàn)最早，表明老年肺臟更易受到脂多糖(LPS)的攻擊，在MODSE發(fā)生過程中起著更為關(guān)鍵的作用。其原因可能是老年肺臟對LPS敏感性增強(qiáng)所致。本文采用油酸(OA)和LPS致傷SD大鼠，建立二次致傷MODSE和青年多器官功能障礙綜合征(MODSY)動物模型對比觀察各自臟器損傷的特點(diǎn)及差異，在此模型的基礎(chǔ)上，檢測肺、心、肝、腎不同臟器組織中細(xì)胞因子TNF-α、IL-6蛋白及mR

2、NA表達(dá)，內(nèi)毒素含量，以及CD14、TLR4受體mRNA及蛋白表達(dá)變化，并檢測肺組織中轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化情況，從老年鼠肺組織CD14、TLR4受體易感性及其對內(nèi)毒素親和性的角度，探討老年肺易損機(jī)制，及其在MODSE發(fā)生中的作用。 方法：1.建立OA/LPS二次致傷MODSE和MODSY大鼠模型。 2.ELISA法檢測血漿及肺、心、肝、腎組織中細(xì)胞因子TNF-α、IL-6蛋白含量，RT-PCR檢測上述組織中mRNA表達(dá)

3、。 3.鱟試劑凝膠法檢測肺、心、肝、腎組織中內(nèi)毒素含量。 4.RT-PCR檢測肺、心、肝、腎組織中CD14、TLR4mRNA表達(dá)水平，免疫組化方法檢測其蛋白表達(dá)。 5.免疫組化方法檢測肺組織中轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化情況。 結(jié)果：1.OA/LPS致傷后2h，青年組和老年組PaO2降至最低值(分別為67.5士8.66mmHg，59.3士7.41mmHg，P＜0.01)，心、肝、腎生化指標(biāo)于6h達(dá)峰值(P＜0.

4、05～0.01)，且老年組臟器損害較同時相點(diǎn)青年組嚴(yán)重(P＜0.05～0.01)。符合動物MODS診斷標(biāo)準(zhǔn)。 2.傷后2h，血清及肺、心、肝和腎組織中TNF-α、IL-6含量和組織中mRNA表達(dá)顯著升高達(dá)峰值，且持續(xù)高于正常對照組(P＜0.05～0.01)，以肺組織升高幅度最大。老年組2h、6h時相點(diǎn)TNF-α、IL-6含量和mRNA表達(dá)均顯著高于同時相點(diǎn)的青年組(P＜0.05)。 3.對照組各臟器組織中均可檢測到一定的

5、內(nèi)毒素基礎(chǔ)含量，以老年組肺組織中含量最高。OA/LPS致傷后2h各組織中內(nèi)毒素含量迅速增加并達(dá)峰值(P＜0.01)，以肺組織中升幅最大，老年組和青年組分別為各自對照組的12倍和9.8倍，腎組織中升幅最小。致傷后6～24h組織中內(nèi)毒素含量明顯回落，但仍顯著高于對照組水平(P＜0.01)。并且2～24h各組織中內(nèi)毒素含量老年組較青年組升高顯著(P＜0.01)。 4.OA/LPS致傷后肺、心、肝和腎組織中CD14、TLR4mRNA表達(dá)

6、均顯著升高(P＜0.05～0.01)；其中以肺組織中最高，升高幅度最大，于2h達(dá)峰值；心、肝、腎組織中于2～6h達(dá)峰值。在相同時相點(diǎn)老年鼠各組織中CD14、TLR4mRNA表達(dá)高于青年鼠(P＜0.05～0.01)。免疫組化表明CD14、TLR4蛋白表達(dá)與其mRNA表達(dá)呈一致的變化趨勢，主要表達(dá)在單核/巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和不同細(xì)胞的細(xì)胞膜上。 5.對照組大鼠肺組織中NF-κBP65蛋白呈弱陽性表達(dá)，陽性細(xì)胞主要為肺巨噬細(xì)胞、肺

7、泡上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞，陽性反應(yīng)產(chǎn)物多分布在胞漿中。OA/LPS致傷后NF-κBP65呈強(qiáng)陽性染色，陽性產(chǎn)物不僅分布在陽性細(xì)胞的胞漿中，胞核中也呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，2h及6h組陽性產(chǎn)物的相對含量較對照組明顯升高(P＜001)，以2h組陽性表達(dá)最強(qiáng)；24h組上述細(xì)胞中陽性著色明顯降低。在同一時相點(diǎn)，尤其2h組，老年鼠肺組織中NF-κBP65表達(dá)顯著強(qiáng)于青年鼠(P＜0.05)； 結(jié)論：1.油酸/脂多糖二次致傷可導(dǎo)致大鼠多器官功能障礙綜合

8、征，老年鼠臟器損害重于青年鼠，其中以肺損傷出現(xiàn)最早，損傷最重。 2.二次致傷后臟器組織中炎癥因子TNF-α、IL-6迅速升高參與了臟器損傷的發(fā)生和發(fā)展；老年鼠組織中炎癥因子升高比青年鼠更為顯著，且以肺組織中升幅最大，與MODSE最先發(fā)生肺損傷關(guān)系密切。 3.油酸/脂多糖致傷后臟器組織中內(nèi)毒素含量大量增加，以老年鼠肺組織中最高，對內(nèi)毒素的親和性最大，與肺臟最先受損有密切關(guān)系。 4.致傷后老年鼠肺組織內(nèi)毒素受體CD1