急性肝衰竭大鼠肝臟樹突狀細(xì)胞TLR4的表達(dá).pdf

1、研究背景：
　　 肝衰竭(Liver failure，LF)是臨床常見的嚴(yán)重肝病癥候群，治療較為困難，病死率極高。其機(jī)制目前還沒有完全明確，常伴有腸源性內(nèi)毒素血癥(intestinalendotoxemia，IETM)。內(nèi)毒素(endotoxin，ETX)，即脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是革蘭氏陰性菌細(xì)胞外膜上的糖脂。固有免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵御細(xì)菌，真菌與病毒等病原微生物的第一道防線。免疫細(xì)胞如巨噬細(xì)胞和樹

2、突狀細(xì)胞(dendriticcells，DC)通過模式識別受體(pattern recognition receptor，PRR)識別病原相關(guān)分子模式(pathogen associated molecular pattern，PAMP)，幫助清除病原體。Toll樣受體(toll-like receptor，TLR)是一種模式識別受體，其中TLR4識別的是LPS。免疫系統(tǒng)通過TLR4識別LPS并激活多種轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)而產(chǎn)生大量促炎性細(xì)胞因

3、子，如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和IL-6，以控制入侵病原體的繁殖與傳播，同時還能削弱免疫反應(yīng)強(qiáng)度。樹突狀細(xì)胞是最主要的抗原提呈細(xì)胞，不僅在誘導(dǎo)初級免疫反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用，而且也可能是誘導(dǎo)免疫耐受的重要因素，還能調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫反應(yīng)。目前對外周血DC的研究較多，而肝臟DC上TLR4表達(dá)情況的研究少見。因而，本實驗擬對急性肝衰竭大鼠肝臟DC的TLR4表達(dá)情況進(jìn)行研究，探討肝衰竭的發(fā)病機(jī)制。
　　 目的：
　　 建立急性肝

4、衰竭大鼠模型，并提取其肝臟樹突狀細(xì)胞，研究其表面TLR4的表達(dá)情況，初步探討肝臟樹突狀細(xì)胞在肝衰竭過程中的功能變化，及其在肝衰竭發(fā)病機(jī)制中的意義與作用。
　　 方法：
　　 1.應(yīng)用硫代乙酰胺(Thioacetamide，TAA)350mg/kg分別于0h、24h進(jìn)行腹腔注射制造肝衰竭大鼠模型。
　　 2.通過觀察一般情況，病理學(xué)檢查，肝功能檢測來檢驗大鼠模型的效果。
　　 3.應(yīng)用磁珠分選的方法提取肝臟

5、樹突狀細(xì)胞，并應(yīng)用蛋白印跡的方法檢測樹突狀細(xì)胞的TLR4表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.健康對照組大鼠一般情況良好，活動自如，反應(yīng)靈敏，大小便正常。而肝衰竭組大鼠，腹腔注射TAA后，出現(xiàn)懶動，進(jìn)食減少，體重進(jìn)行性下降，精神差，嗜睡，對外周刺激反應(yīng)減弱，尿量減少，尿色加深，部分有鼻部及注射部位瘀斑，3只于實驗前病死。肝衰竭組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞腫脹，可見片狀壞死。急性肝衰竭組大鼠血清ALT、AST、TB較正常對照

6、組明顯升高。差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-17.578，P<0.01，t=-18.387，P<0.01，t=-11.684，P<0.01)
　　 2.經(jīng)過二步灌流法獲得肝臟非實質(zhì)細(xì)胞后(non-parenchymal cells，NPC)，再行分選柱二次分選，每單只大鼠肝臟可以獲得OX62陽性細(xì)胞0.7-1.2×106個細(xì)胞。
　　 3.急性肝衰竭組大鼠血清ETX、IL-10較正常對照組上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-3.22

7、8，P<0.01，t=5.673，P<0.01)。
　　 4.急性肝衰竭組大鼠肝臟樹突狀細(xì)胞表面TLR4蛋白表達(dá)低于正常對照組。
　　 結(jié)論：
　　 1.通過一般情況，病理學(xué)檢查，肝功能的表現(xiàn)表明本研究成功復(fù)制了急性肝衰竭大鼠的模型，并進(jìn)一步獲得了所研究的目的細(xì)胞。
　　 2.急性肝衰竭大鼠肝衰竭時內(nèi)毒素含量上升，血清抗炎性因子IL-10產(chǎn)量較正常對照組升高。
　　 3.本研究表明：急性肝衰竭組大