解耦聯(lián)蛋白2在急性肝衰竭大鼠肝臟中的動態(tài)表達和意義.pdf

1、背景和目的:
　　 急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)是肝細胞大面積壞死所引起的肝功能嚴重障礙綜合征,其病情兇險而復雜、并發(fā)癥多、預后差、病死率高,其發(fā)病機制目前尚未完全闡明,目前多認可“二次打擊學說”。
　　 解耦聯(lián)蛋白2(UCP2)是最近發(fā)現(xiàn)的線粒體內(nèi)膜解耦聯(lián)蛋白家族成員,廣泛分布于人類及嚙齒類動物的多種器官。目前,UCP2的生理功能尚不十分明確,其可能的功能包括調(diào)節(jié)熱量生成、減少線粒體內(nèi)過

2、量的反應活性氧簇(reactiveoxygen species,ROS)生成、抑制炎癥反應和細胞凋亡、抗氧化及減少脂肪酸的跨膜流動等,尤其是在調(diào)節(jié)ROS生成、抑制炎癥反應和細胞凋亡方面有著重要的作用。研究表明,在非酒精性脂肪肝及內(nèi)毒素損傷大鼠肝臟模型中存在自由基損傷及內(nèi)毒素血癥,肝臟內(nèi)UCP2表達增加。但UCP2在急性肝功能衰竭肝臟中的表達情況與急性肝功能衰竭關系的研究國內(nèi)未見有報道。本實驗既是通過研究急性肝功能衰竭大鼠肝臟UCP2mR

3、NA及其蛋白表達情況,進一步闡明急性肝功能衰竭的發(fā)病機制。
　　 方法：
　　 一、大鼠分組和模型建立健康雄性Sprague-Dawley系大鼠51只,體重200～250g,按隨機數(shù)字表法將大鼠分為健康對照組(A組)和模型組(B組),其中健康對照組6只,模型組又按不同時間點分為6h、12h、24h、36h、48h5個亞組,每組各6只。另外B組留15只,觀察其生存率。實驗前12h禁食,4h前禁水。模型組采用腹腔注射D-Ga

4、l(800 mg/kg)、LPS(40μg/kg)構(gòu)建大鼠急性肝功能衰竭模型,健康對照組在開始建模時腹腔注射等量0.9％NaCl溶液。在相應時間點處死各組大鼠,10％水合氯醛0.35 ml/kg麻醉,經(jīng)門靜脈采血,取出肝組織立即用中性福爾馬林固定12h,脫水、石蠟包埋,另取部分肝組織立即液氮凍存。
　　 二、指標檢測觀察B組大鼠24h存活率。取肝組織,采用蘇木素-伊紅(HE)染色,光鏡下觀察肝組織損傷情況,采用免疫組織化學方法檢

5、測不同時間點UCP2蛋白的表達,半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)法測定肝組織UCP2mRNA的表達。同時測定造模后各時間點血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(AST)和總膽紅素(TB),及肝組織丙二醛(MDA)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、模型組大鼠24h存活率為60％,且造模后6h生化指標明顯升高,TB于36h達到峰值,為93.0±8.9；ALT、AST24h達到最高峰,ALT為8346.7

6、±1363.1,AST為9766.7±1274.1；肝組織丙二醛(MDA)8.34±1.13,隨后逐漸下降,且相鄰各模型組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。肝病理學表現(xiàn)為肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞,肝細胞空泡變性、腫脹,可見不同程度的細胞凋亡及壞死,小葉內(nèi)及匯管區(qū)有大量炎性細胞浸潤,提示ALF動物模型成功建立。
　　 2、UCP2蛋白在健康對照組大鼠肝臟中幾乎不表達,于造模后6h可見明顯表達,為0.06660±0.00705,24h達

7、高峰,為0.12446±0.02037,隨后逐漸減少,48h仍顯著高于對照組,且相鄰各模型組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 3、健康對照組 UCP2mRNA呈微量表達；模型組大鼠肝臟UCP2mRNA于造模后6h即可見明顯表達,為0.767±0.085,至24h達高峰,為1.166±0.094,48h仍顯著高于健康對照組,為0.731±0.084,隨后逐漸減少,48h仍顯著高于對照組,且相鄰各模型組之間差異有統(tǒng)計學意