解耦聯(lián)蛋白2在急性肝衰竭大鼠肝臟中的動態(tài)表達(dá)和意義.pdf

1、背景和目的:
　　 急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)是肝細(xì)胞大面積壞死所引起的肝功能嚴(yán)重障礙綜合征,其病情兇險而復(fù)雜、并發(fā)癥多、預(yù)后差、病死率高,其發(fā)病機(jī)制目前尚未完全闡明,目前多認(rèn)可“二次打擊學(xué)說”。
　　 解耦聯(lián)蛋白2(UCP2)是最近發(fā)現(xiàn)的線粒體內(nèi)膜解耦聯(lián)蛋白家族成員,廣泛分布于人類及嚙齒類動物的多種器官。目前,UCP2的生理功能尚不十分明確,其可能的功能包括調(diào)節(jié)熱量生成、減少線粒體內(nèi)過

2、量的反應(yīng)活性氧簇(reactiveoxygen species,ROS)生成、抑制炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡、抗氧化及減少脂肪酸的跨膜流動等,尤其是在調(diào)節(jié)ROS生成、抑制炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡方面有著重要的作用。研究表明,在非酒精性脂肪肝及內(nèi)毒素?fù)p傷大鼠肝臟模型中存在自由基損傷及內(nèi)毒素血癥,肝臟內(nèi)UCP2表達(dá)增加。但UCP2在急性肝功能衰竭肝臟中的表達(dá)情況與急性肝功能衰竭關(guān)系的研究國內(nèi)未見有報道。本實(shí)驗既是通過研究急性肝功能衰竭大鼠肝臟UCP2mR

3、NA及其蛋白表達(dá)情況,進(jìn)一步闡明急性肝功能衰竭的發(fā)病機(jī)制。
　　 方法：
　　 一、大鼠分組和模型建立健康雄性Sprague-Dawley系大鼠51只,體重200～250g,按隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為健康對照組(A組)和模型組(B組),其中健康對照組6只,模型組又按不同時間點(diǎn)分為6h、12h、24h、36h、48h5個亞組,每組各6只。另外B組留15只,觀察其生存率。實(shí)驗前12h禁食,4h前禁水。模型組采用腹腔注射D-Ga

4、l(800 mg/kg)、LPS(40μg/kg)構(gòu)建大鼠急性肝功能衰竭模型,健康對照組在開始建模時腹腔注射等量0.9％NaCl溶液。在相應(yīng)時間點(diǎn)處死各組大鼠,10％水合氯醛0.35 ml/kg麻醉,經(jīng)門靜脈采血,取出肝組織立即用中性福爾馬林固定12h,脫水、石蠟包埋,另取部分肝組織立即液氮凍存。
　　 二、指標(biāo)檢測觀察B組大鼠24h存活率。取肝組織,采用蘇木素-伊紅(HE)染色,光鏡下觀察肝組織損傷情況,采用免疫組織化學(xué)方法檢

5、測不同時間點(diǎn)UCP2蛋白的表達(dá),半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法測定肝組織UCP2mRNA的表達(dá)。同時測定造模后各時間點(diǎn)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(AST)和總膽紅素(TB),及肝組織丙二醛(MDA)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、模型組大鼠24h存活率為60％,且造模后6h生化指標(biāo)明顯升高,TB于36h達(dá)到峰值,為93.0±8.9；ALT、AST24h達(dá)到最高峰,ALT為8346.7

6、±1363.1,AST為9766.7±1274.1；肝組織丙二醛(MDA)8.34±1.13,隨后逐漸下降,且相鄰各模型組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。肝病理學(xué)表現(xiàn)為肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞,肝細(xì)胞空泡變性、腫脹,可見不同程度的細(xì)胞凋亡及壞死,小葉內(nèi)及匯管區(qū)有大量炎性細(xì)胞浸潤,提示ALF動物模型成功建立。
　　 2、UCP2蛋白在健康對照組大鼠肝臟中幾乎不表達(dá),于造模后6h可見明顯表達(dá),為0.06660±0.00705,24h達(dá)

7、高峰,為0.12446±0.02037,隨后逐漸減少,48h仍顯著高于對照組,且相鄰各模型組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3、健康對照組 UCP2mRNA呈微量表達(dá)；模型組大鼠肝臟UCP2mRNA于造模后6h即可見明顯表達(dá),為0.767±0.085,至24h達(dá)高峰,為1.166±0.094,48h仍顯著高于健康對照組,為0.731±0.084,隨后逐漸減少,48h仍顯著高于對照組,且相鄰各模型組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意