Notch-1-Jagged-1在大鼠肝纖維模型中的動態(tài)表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：肝纖維化(hepaticfibrosis)是各種致病因素所致的肝臟損害，可進(jìn)一步進(jìn)展為肝硬化，甚至肝癌，嚴(yán)重危害人類健康。其發(fā)病機(jī)制一直是研究的焦點。本實驗通過探討Notch-1及其配體Jagged-1在肝纖維化大鼠模型中的動態(tài)表達(dá)，及其與轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的相關(guān)性，來分析Notch/Jagged信號通路在肝纖維化發(fā)生機(jī)制中的作用。
　　 方法：通過腹腔注射二甲基亞硝胺(DMN)誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型。健康雄性

2、SD大鼠85只，隨機(jī)分為正常對照組（10只）和模型組（60只），再留15只大鼠按造模方法注射DMN并觀察生存率。模型組大鼠腹腔注射0.5％的二甲基亞硝胺(DMN)0.2ml/100g，每周前3天每天1次，連續(xù)4周建立肝纖維化模型。而后停止染毒，繼續(xù)常規(guī)喂養(yǎng)至8周末。正常組大鼠予普通喂養(yǎng)至四周觀察生存情況并隨機(jī)取6只處死。模型組大鼠分別于造模后4d、1w、2w、4w、6w、8w各時間點結(jié)束時隨機(jī)取6只處死，動態(tài)測定不同時間點大鼠血清丙氨酸

3、氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、白蛋白(Alb)和透明質(zhì)酸(HA)的變化，采用HE、Masson染色，光學(xué)顯微鏡下觀察肝組織病變情況，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和免疫組織化學(xué)法檢測不同時間點肝臟Notch-1、Jagged-1、TGF-β1mRNA和蛋白表達(dá)。實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，采用SPSS13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　

4、1、模型建立四周后，大鼠出現(xiàn)毛色灰暗，精神萎靡，食欲下降，易受驚，體重下降等表現(xiàn)。血清學(xué)檢測顯示ALT、AST、HA明顯升高，Alb下降。病理學(xué)表現(xiàn)為肝小葉結(jié)構(gòu)破壞或消失，由匯管區(qū)或中央靜脈伸出較粗大的纖維條索包繞肝組織形成假小葉，提示肝纖維化模型成功建立。正常組與模型組大鼠4w的病死率分別為0和20％。
　　 2、各組大鼠肝功能檢測顯示，ALT、AST均于造模后4d開始上升，并于4w達(dá)到最高峰，分別為169.2±16.2U/L

5、和193.3±31.1U/L，明顯高于正常組29.2+4.7和42.7±6.3(P＜0.05)。Alb自造模4d后逐漸下降，為31.3±0.3g/L，于6周降到最低，為22.2±1.2g/L，至8周略有回升，為25.4±0.9g/L。HA也于6周達(dá)到最高峰，為540.2±29.1ng/ml，且各模型組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3、免疫組織化學(xué)結(jié)果表明，相鄰切片Notch-1和Jagged-1的陽性表達(dá)

6、部位大體一致。在健康對照組大鼠肝組織中，僅在血管和膽管周圍有少量表達(dá)，在DMN作用后，血管和膽管周圍Notch-1、Jagged-1陽性表達(dá)明顯增加，隨著肝纖維化進(jìn)程的加重，其表達(dá)強度相應(yīng)增強。除血管和膽管周圍，部分肝實質(zhì)細(xì)胞和炎性細(xì)胞中也有表達(dá)。停止染毒后，隨著肝纖維化的修復(fù)和炎癥程度的降低，其表達(dá)強度也有所減少。各實驗組與對照組比較，Notch-1、Jagged-1蛋白的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，并與TGFβ1蛋白的動態(tài)

7、表達(dá)量呈正相關(guān)(r=0.898;0.896；P＜0.01)。
　　 4、RT-PCR結(jié)果顯示，對照組Notch-1、Jagged-1、TGFβ1mRNA僅有少量表達(dá)，造模組4d即開始升高，至6周達(dá)到高峰，后逐漸下降，與對照組相比，各時間點變化差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)且相關(guān)分析結(jié)果顯示Notch-1、Jagged-1mRNA表達(dá)水平與TGFβ1mRNA表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.767;0.844;P＜0.01)。

8、　　 5、大鼠肝臟組織Notch-1、Jagged-1mRNA表達(dá)水平與肝臟纖維化分期的相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，Notch-1、Jagged-1mRNA與肝纖維化分級呈正相關(guān)(r=0.821;0.917，P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1、腹腔注射0.5％的DMN0.2ml/100g，每周前3天每天1次，連續(xù)4周，成功建立肝纖維化模型。
　　 2、Notch-1、Jagged-1、TGF-β1在正常SD大鼠肝組織均