Caveolin-1在乳腺癌中的表達及其意義.pdf

1、乳腺癌是危害婦女健康的主要惡性腫瘤之一，占婦女癌癥死亡率的首位，闡明其發(fā)生機理對診斷和治療具有重要意義。微囊(Caveolae)是細(xì)胞膜系統(tǒng)中的一個十分重要的結(jié)構(gòu)。微囊蛋白-1(Caveolin-1)是該結(jié)構(gòu)的重要組成成分之一，在多種分化成熟的細(xì)胞(上皮細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞)中表達。Caveolin-1在維系細(xì)胞的脂類代謝平衡、控制細(xì)胞的增殖和調(diào)節(jié)細(xì)胞的遷移等諸多方面發(fā)揮著重要的作用。近年來，微囊蛋白基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用受到了

2、廣泛的關(guān)注。本研究運用免疫組化方法檢測人類原發(fā)乳腺癌和正常乳腺組織中微囊蛋白-1的表達狀況，分析該表達與某些臨床病理因素相關(guān)性。 實驗材料與方法： 1．材料 標(biāo)本來源于遼寧省腫瘤醫(yī)院，1997年-2000年手術(shù)切除的原發(fā)性浸潤性導(dǎo)管癌組織84例。腫瘤組織經(jīng)10％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋?；颊呔鶠榕裕挲g25-73歲，平均年齡46歲。對其進行分期和病理學(xué)分型，TNM分期以美國癌癥研究委員會(AJCC)和國際抗癌

3、聯(lián)盟(UICC)聯(lián)合制定(1988年)的為標(biāo)準(zhǔn)。Ⅰ期11例，Ⅱ期51例，Ⅲ期18例，Ⅳ期4例。其中高分化的13例，中分化的28例，低分化的43例。T115例，T249例，T311例。有腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者45例，無轉(zhuǎn)移者39例?；颊咝g(shù)前均未接受過放、化療治療。 2．實驗方法 2.1石蠟包埋組織進行連續(xù)切片，厚度4μm，用于HE和免疫組化染色 2.2免疫組化染色 試劑：Caveolin-1多抗(sc-894)購

4、于美國Santa Cruze公司，ER及CerB-2即用型、S-P超敏試劑盒(KIT-9710)和。DAB酶底物顯色試劑盒(DAB-0031)購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。 切片染色方法按鏈霉素抗生素蛋白--過氧化物酶(S-P)法試劑盒說明書步驟操作。抗Caveolin-1(1:100)、ER及CerbB-2均經(jīng)高壓修復(fù)預(yù)處理。抗原修復(fù)液為pH6.0檸檬酸緩沖液。經(jīng)：DAB染色后，蘇木素對比復(fù)染，中性樹膠封片。以PBS代替一抗作

5、為陰性對照。 3．陽性判斷標(biāo)準(zhǔn) 盲法判定結(jié)果。每張切片分別由兩位病理醫(yī)師獨立閱片，一致肯定為陽性者方被視為陽性。光鏡下，每張切片選擇5個高倍視野，每一視野計數(shù)100個腫瘤細(xì)胞。Caveolin-1定位于為細(xì)胞膜和/或細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒，CerB-2定位于細(xì)胞漿，ER定位于細(xì)胞核。取正常乳腺組織導(dǎo)管上皮作為陽性對照。(1)按陽性細(xì)胞百分率計分，0-25％為0分，26％-50％為1分，51％-75％為2分，76％-100為3

6、分。(2)按染色強度計分，無著色為0分，著色略深的為1分，較深的為2分。<2分為陰性，2～5分為陽性。 4．統(tǒng)計學(xué)分析 統(tǒng)計學(xué)軟件為SPSS11.0版。Caveolin-1與臨床病理學(xué)因素相關(guān)性采用卡方檢驗，α=0.05，P值為雙側(cè)。 實驗結(jié)果： caveolin-1是一種膜/漿表達蛋白，在正常乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞中廣泛表達。84例原發(fā)性乳腺癌組織中caveolin-1呈陽性表達者38例(45.

7、2％)。T1、T2、T3的陽性表達率分別為66.7％、41％、36.4％，三者間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；但T1(≤2cm)和T2+T3(>2cm)之間卻有顯著性差異(P=0.036)。在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌中,caveolin-1陽 性率分別為81.8％、45.1％、33.3％和25％，有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.047)。caveolin-1在腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中陽性表達率為31.3％，淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移癌病例中陽性表達率為66.7％，二者具

8、有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.001)。84例乳腺癌中，CerbB-2的陽性率為38％(32/84)，ER的陽性率為45.2％(38/84)。caveolin-1的表達與乳腺癌的分化程度、ER受體、CerbB-2的表達和年齡等無關(guān)。 討論： 惡性腫瘤的發(fā)生具有多階段、多因素的特征，其中涉及癌基因的突變和活化；抑癌基因的缺失或過甲基化及凋亡調(diào)解機制的紊亂等遺傳性改變。許多研究表明Caveolin-1基因位于人類七號染色體q31

9、.1，這個位置在惡性腫瘤中常常缺失，并且被認(rèn)為該區(qū)域還有腫瘤抑制基因。這在人類原發(fā)乳腺癌組織及其MCF-7細(xì)胞系中也得到證實。另據(jù)報道Caveolin-1對細(xì)胞的增值和分裂起調(diào)控作用，乳腺和肺細(xì)胞系發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)化時表達降低，反義抑制Caveolin-1或其顯性失活形成的表達足以誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，而將其倒入纖維母細(xì)胞和乳腺腫瘤細(xì)胞系后可反轉(zhuǎn)一些惡性特征，實際上Caveolin-1被認(rèn)為是20個腫瘤抑制基因后選基因。 本研究表明Caveo

10、lin-1廣泛存在正常乳腺導(dǎo)管上皮和血管內(nèi)皮細(xì)胞，而它在乳腺癌中表達顯著降低，這于文獻中報道的乳腺癌、肺癌、胃癌等多種腫瘤組織結(jié)果一致。對于Caveolin-1在腫瘤中表達下降分子學(xué)機制目前主要認(rèn)為于Caveolin-1第132位密碼子(P132L)基因突變及其啟動子甲基化有關(guān)。Lee H<'[10]>等在人類原發(fā)乳腺癌中及其細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)有16％的Caveolin-1基因突變，Engelman Ja等在人類乳腺癌MCF-7和T-47D兩

11、種細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)Caveolin-1基因CPG區(qū)域廣泛甲基化，蛋白表達下降；而在正常人類乳腺上皮卻無甲基化現(xiàn)象，且蛋白呈高水平表達。但Chen ST在乳腺癌組織中卻僅僅發(fā)現(xiàn)25％Caveolin-1蛋白CPG位點出現(xiàn)四種類型的甲基化，卻無突變現(xiàn)象．大量實驗證明Caveolin-1的架構(gòu)區(qū)具有蛋白激酶抑制活性，能夠抑制EGF-R、Raf、G蛋白、C-src酪氨酸激酶、MEK-1和ERK-2等許多與細(xì)胞增值、凋亡、粘附、運動相關(guān)的信號因子的活

12、性，而這些因子又是激活P42-44MAPK及其上游核轉(zhuǎn)錄因子Jun、Fos以及CyclinD的重要途徑。本研究同時發(fā)現(xiàn)Caveolin-1表達與腫塊大小在T1和T2+T3之間有統(tǒng)計學(xué)差異，并成負(fù)相關(guān)。所以乳腺癌中Caveolin-1表達下降，使其負(fù)向調(diào)控受到抑制；正常乳腺導(dǎo)管上皮及瘤細(xì)胞過度增值和凋亡失衡，可能成為最終導(dǎo)致腫瘤發(fā)生和發(fā)展的遺傳因素之一。有關(guān)這方面的工作正在進行中。 體內(nèi)外實驗還發(fā)現(xiàn)Caveolin-1能抑制表皮生

13、長因子受體家族中的一種重要受體(Cerb B-2)酪氨酸激酶活性，Cerb B-2異常表達也能負(fù)向調(diào)控Caveolin-1<'[13]>引。 而本實驗Cerb B-2陽性者Caveolin-1表達率(37.5％)雖然明顯低于陰性者(61％)，卻未顯示出統(tǒng)計學(xué)差異，可能與總病例數(shù)中只有60％作了CerbB-2檢測，導(dǎo)致組間例數(shù)較少有關(guān)。目前研究認(rèn)為Caveolin-1有助于細(xì)胞粘附分子 E-Cadherin/β-Catenin復(fù)合

14、物的形成，從而加強細(xì)胞間的連接與通訊<'[14]>。Caveolin-1表達上調(diào)能減低乳腺癌<'[15]>、肺癌細(xì)胞<'[16]>的運動能力。此外Fiucci<'[17]>等發(fā)現(xiàn)Caveolin-1的存在于基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)表達成負(fù)相關(guān)，本研究發(fā)現(xiàn)有腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中Caveolin-1表達明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，且隨著病期的早晚其表達成下調(diào)趨勢，提示Caveolin-1表達下調(diào)可能通過影響

15、乳腺癌細(xì)胞β-Catenin的分布和/或MMPs和WEGF、Cerb B-2基因的表達間接或直接提高腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力?？梢娺M一步探討Caveolin-1與諸轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的關(guān)系能夠加深我們對乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移成因的認(rèn)識。 Caveolin-1作為腫瘤抑制因子的作用機制已有大量文獻報道，但在多種腫瘤甚至同一種腫瘤的研究中還有很多爭論。Caveolin-1在腎透明細(xì)胞癌<'[18]>、前列腺癌<'[19]>組織中表達增高，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

16、移、分期成正相關(guān)，這于我們在乳腺癌組織中的研究結(jié)果矛盾。而對于Caveolin-1表達與乳腺癌激素ER PgR的關(guān)系，Chm ST和我們的結(jié)果一致認(rèn)為二者無關(guān)，而Sagara Y<'[20]>卻作出了相反的結(jié)論。 眾所周知，腫塊大小、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分期都是影響乳腺癌的預(yù)后的獨立因素，本研究提示：Caveolin-1在乳腺癌中的表達與三者密切相關(guān)，因此探索Caveolin-1與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系應(yīng)成為下一階段的重要課題。 結(jié)