TNF-α及其受體在肺纖維化大鼠模型中的動態(tài)表達和意義.pdf

1、目的：研究腫瘤壞死因子-α(tumour necrosis factor-α)及其Ⅰ、Ⅱ型受體在肺纖維大鼠中的動態(tài)表達和意義。
　　 方法：我們采用如下研究方法，將90只雄性Wistar大鼠。隨機分為正常對照組(n=30)，疾病模型組組(n=30)和甲強龍治療組(n=30)正常對照組給予生理鹽水，而疾病模型組和治療組給予博來霉素(5mg.kg-1)一次性氣管內(nèi)注入，且治療組于造模當天腹腔注射甲強龍(15mg/kg，每天一次，而正

2、常組和疾病模型組腹腔注射生理鹽水(0.3ml/只)，每天一次，后于第1、3、7、14、21、28天腹主動脈采并血處死各組大鼠各五只，并行支氣管肺泡灌洗，取支氣管肺泡灌洗液和肺組織，應(yīng)用ELISA法測定BALF中TNF-α的水平、血清中TNF-α、TNFR1、TNFR2的水平，用免疫組化法測組織中TNFR1、TNFR2的表達水平，用堿水解法測肺組織中羥脯氨酸的含量。然后進行統(tǒng)計學分析。
　　 結(jié)果：第一組(正常對照組)支氣管肺泡灌

3、洗液(BALF)中TNF-α及血清中TNF-α、TNFR1、TNFR2的含量較低，組織中TNFR1、TNFR2皆為弱表達，肺組織勻漿中羥脯氨酸含量也較低，病理切片可見肺泡結(jié)構(gòu)無明顯異常，各時間段白細胞總數(shù)和中性粒細胞百分比變化不明顯。第二組(疾病模型組)BALF和血清中TNF-α、含量較高，各時間段和正常對照組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，在第7天時灌洗液和血清中TNF-α增高明顯，在第14天達到高峰，然后逐漸降低，而血清中的TNF

4、R1、TNFR2隨時間的延遲逐漸升高，在21天時達到高峰，以后逐漸下降，第28天仍高于正常組，各時間段和正常對照組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。肺組織中TNFR1、TNFR2為強表達，在21天達到峰值，且各時間段TNFR1、TNFR2的蛋白表達高于正常對照組，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。肺組織中羥脯氨酸含量隨時間的延長逐漸升高，各時間段高于正常組(P＜0.05)，病理切片顯示3天、7天肺泡炎性細胞明顯增加，第7天時肺泡間隔增厚，肺

5、泡腔縮小，第14天時間隔明顯增厚，肺泡腔明顯縮小，成纖維細胞增多，28天時肺泡結(jié)構(gòu)明顯遭到破壞，纖維化明顯。各時間段BALF中白細胞總數(shù)和中性粒細胞百分比增多，高于正常對照組，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，分別于第7天、14天達到高峰。第三組(甲強龍治療組)支氣管肺泡灌洗液中TNF-α及血清中TNF-α、TNFR1、TNFR2呈低水平增高趨勢，較疾病模型組有所下降且自第7天下降明顯，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，且各時間點仍高于正常對照

6、組，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，組織中TNFR1、TNFR2蛋白表達較模型組組也有所減弱，自第七天時差異明顯，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但各時間段蛋白表達仍高于正常對照組，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。羥脯氨酸含量較疾病模型組有多下降，自第七天時下降明顯，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且個時間段仍高于正常對照組，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。病理切片可見肺泡結(jié)構(gòu)有輕度異常，3天、7天可見少量的炎性細胞浸潤，14天、28天時肺泡結(jié)構(gòu)

7、無破壞，僅有少量的炎性細胞浸潤。各時間段BALF中自細胞總數(shù)和中性粒細胞百分比呈低水平增高趨勢，較模型組有所下降，自第七天時下降明顯，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，且各時間段仍高于正常對照組，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：①TNF-α通過啟動TNFR1、TNFR2信號傳導途徑從而在肺纖維化形成中發(fā)揮著重要作用。研究表明TNF-α蛋白表達陽性的中性粒細胞在急性肺泡炎期明顯增加，可見其對肺纖維化的發(fā)生和發(fā)展可能起重要作