周期性機(jī)械牽張對(duì)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞TLR4表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的：
　　 目前臨床上救治危重患者的重要措施之一是機(jī)械通氣(mechanical ventilation，MV)，及早對(duì)患者進(jìn)行機(jī)械通氣不但可以糾正難治性低氧血癥，而且對(duì)防治肺泡塌陷以及對(duì)抗肺水腫也具有重要作用。但是機(jī)械通氣也伴隨著許多并發(fā)癥，如機(jī)械通氣相關(guān)性肺損傷(ventilation-induced lung injury,VILI)，目前越來(lái)越多的研究人員對(duì)此并發(fā)癥高度關(guān)注。參與VILI的細(xì)胞種類有不少，研究較多

2、的有中性粒細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞等，而目前的研究熱點(diǎn)是VILI中肺泡巨噬細(xì)胞(Alveolar macrophages，AM)所產(chǎn)生的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，在生理情況下AM分泌的細(xì)胞因子的種類和數(shù)量都十分有限，但在潮氣量通過(guò)機(jī)械牽張導(dǎo)致肺損傷（即傷害性機(jī)械通氣）的病理情況下，AM活化后可分泌大量的炎性細(xì)胞因子、趨化因子、炎性介質(zhì)等多種生物活性物質(zhì)而導(dǎo)致肺損傷。本文中研究的TLR4便是主要存在于哺乳動(dòng)物肺臟的巨噬細(xì)胞表面，它是T

3、oll樣受體家族的成員之一，是重要的固有免疫分子。由于在體實(shí)驗(yàn)受神經(jīng)體液等多種因素的調(diào)節(jié)，單純的機(jī)械牽張對(duì)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞上TLR4受體的影響尚不是很清楚。我們的實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谔接憴C(jī)械牽張對(duì)大鼠AM Toll樣受體4(TLR4)表達(dá)的影響。
　　 方法：用預(yù)冷的無(wú)菌的PBS-H（10％小牛血清的PBS和含10U/ml肝素）對(duì)大鼠進(jìn)行支氣管肺泡充分灌洗，然后將肺泡灌洗液中的AM進(jìn)行分離和純化，最后收集的貼壁細(xì)胞便是AM。本實(shí)驗(yàn)將培養(yǎng)

4、后的AM隨機(jī)分為3組(n=6):機(jī)械牽張6h組、機(jī)械牽張8h組和靜止對(duì)照組。機(jī)械牽張組細(xì)胞采用美國(guó)Flexercell公司生產(chǎn)的Flexercell4000TTM應(yīng)力加載系統(tǒng)，施加的牽張力大小為能夠使變形膜拉伸30％，牽張頻率為30次/min，牽拉∶松弛=1∶1，牽張時(shí)間分別為6h和8h。靜止對(duì)照組細(xì)胞除了未施加周期性牽張外，其余條件均同牽張8h組。逆轉(zhuǎn)錄酶PCR(reverse transcriptase PCR，RT-PCR)檢測(cè)A

5、M上的TLR4 mRNA的表達(dá);ELISA檢測(cè)巨噬細(xì)胞炎性蛋白2（macrophage inflammatory protein2，MIP-2）的濃度;免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)AM上TLR4蛋白的表達(dá)。最后的數(shù)據(jù)用統(tǒng)計(jì)學(xué)進(jìn)行處理。
　　 結(jié)果：AM的TLR4 RT-PCR結(jié)果用TLR4 mRNA/ACTINmRNA的OD比值表示，與對(duì)照組比，機(jī)械牽張組TLR4mRNA條的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），機(jī)械牽張6h組與8h組表達(dá)