TGF-β1、PDGF-B在TLR4信號(hào)通路中作用的研究.pdf

1、前期研究表明TGF-β1、PDGF-B基因在LPS介導(dǎo)的小鼠乳腺上皮細(xì)胞(MECs)差異顯著的上調(diào)，且小鼠MECs在LPS刺激下通過(guò)TLR4信號(hào)通路引起細(xì)胞分泌前炎癥細(xì)胞因子而調(diào)節(jié)免疫和炎癥，為了研究TGF-β1、PDGF-B基因在TLR4信號(hào)通路的作用，本研究采用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)對(duì)TGF-β1和PDGF-B基因進(jìn)行沉默，用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法篩選最佳轉(zhuǎn)染條件，繼續(xù)采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法分別檢測(cè)它們沉默后LPS介導(dǎo)其

2、下游信號(hào)Smad3和PI3K mRNA表達(dá)量，用ELISA方法檢測(cè)其下游信號(hào)Smad3和PI3K蛋白含量，ELISA方法檢測(cè)LPS介導(dǎo)細(xì)胞分泌前炎癥細(xì)胞因子IL-6和TNF-α的量。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：選用TGF-β1-mus-1212、PDGF-B-mus-886 siRNA轉(zhuǎn)染片段50 nM、30 nM、20 nM濃度組都能極顯著抑制TGF-β1和PDGF-B的mRNA表達(dá)(P＜0.01)，其中，TGF-β1-mus-1212

3、片段、PDGF-B-mus-886片段的50 nM濃度下各轉(zhuǎn)染抑制率分別最高。TGF-β1沉默后，LPS刺激下其下游信號(hào) Smad3 mRNA表達(dá)量和細(xì)胞分泌量與LPS對(duì)照組相比呈顯著性降低(P＜0.05)，細(xì)胞分泌TNF-α的量比LPS對(duì)照組顯著降低(P＜0.05)，分泌IL-6的量各組無(wú)變化(P＞0.05)。PDGF-B沉默后，LPS刺激下其下游PI3K的mRNA表達(dá)量與LPS對(duì)照組相比呈顯著性降低(P＜0.05)，PI3K蛋白含量

4、與LPS對(duì)照組相比有所降低，但差異不顯著(P＞0.05)，細(xì)胞分泌IL-6的量與LPS對(duì)照組相比呈顯著性降低(P＜0.05)，分泌TNF-α的量各組無(wú)變化(P＞0.05)。
　　結(jié)果提示：采用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)成功對(duì)TGF-β1、PDGF-B基因沉默；小鼠MECs中TGF-β1與Smad3有直接關(guān)系，TGF-β1能引起LPS介導(dǎo)的其下游信號(hào)Smad3表達(dá)和前炎癥因子的分泌，它可能是小鼠MECs上TLR4信號(hào)通路中的關(guān)鍵基因；PDG