TGF-β1-Smad信號(hào)通路在產(chǎn)后壓力性尿失禁中的作用研究.pdf

1、研究背景：
　　壓力性尿失禁（stress urinary incontinence，SUI）是指腹壓增加時(shí)出現(xiàn)不自主的尿液自尿道外口溢出，但不是由膀胱逼尿肌的收縮壓或膀胱壁對(duì)尿液的張力壓所引起的，常見于膀胱、尿道膨出和陰道前壁脫垂患者。產(chǎn)后SUI（postpartum stress incontinence，PSI)是指繼發(fā)于妊娠和分娩之后出現(xiàn)的SUI，其發(fā)病率約為7％～40%，是女性SUI中最常見的類型，嚴(yán)重影響了產(chǎn)后婦女的身

2、心健康。近年來，其發(fā)病機(jī)制日益受到國內(nèi)外眾多學(xué)者的關(guān)注。
　　吊橋理論認(rèn)為陰道前壁等尿道支撐組織的受損松弛是引起SUI發(fā)生的主要原因。膠原蛋白是構(gòu)成陰道前壁等尿道支撐組織中細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的重要組成部分，大量研究發(fā)現(xiàn)SUI患者盆底結(jié)締組織中I、Ⅲ型膠原含量減少，致使支持組織松馳無力，從而出現(xiàn)尿道順應(yīng)性降低、尿道閉合障礙，進(jìn)而導(dǎo)致SUI的發(fā)生。也有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)在SUI患者中盆底組織的I、

3、Ⅲ型膠原蛋白合成減少與TGF-β1表達(dá)下降密切相關(guān)，但具體機(jī)制尚不明確。TGF-β1是與膠原代謝關(guān)系最為密切的細(xì)胞因子，其通過與細(xì)胞膜表面的TGF-β1Ⅱ型受體（TGF-β1 receptor II，TβR-II）結(jié)合，從而活化受體調(diào)節(jié)型Smads蛋白(receptor-regulated Smads，R-Smads)。 Smads是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)TGF-β1的分子，它可以將 TGF-β1信號(hào)直接由細(xì)胞膜轉(zhuǎn)到入細(xì)胞核內(nèi)，當(dāng)其

4、功能異常，TGF-β1信號(hào)的傳導(dǎo)會(huì)受到影響。Smad3是主要介導(dǎo)TGF-β1和活化素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的R-Smads的蛋白，其磷酸化后與受體協(xié)同型Smads形成復(fù)合物，在細(xì)胞核內(nèi)可直接與DNA結(jié)合作為轉(zhuǎn)錄因子，最后影響膠原蛋白基因的轉(zhuǎn)錄應(yīng)答。Smad7通過拮抗絲氨酸/蘇氨酸激酶，與TGF-β1 I型受體（TGF-β1 receptor I， TβR-II）TβR-I緊密結(jié)合，從而使Smad3無法磷酸化，阻斷信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，負(fù)性調(diào)節(jié)TGF-β1/S

5、mads信號(hào)傳導(dǎo)通路。TGF-β1/Smad信號(hào)通路與產(chǎn)后SUI關(guān)系的研究報(bào)道較少，本研究擬建立產(chǎn)后 SUI大鼠模型，探討大鼠陰道前壁組織中TGF-β1/Smad信號(hào)通路中重要信號(hào)蛋白（TβR-Ⅱ、Smad3、Smad7）的表達(dá)與SUI發(fā)病的相關(guān)性。
　　目的：
　　本研究通過陰道球囊擴(kuò)張法建立產(chǎn)后SUI大鼠模型，釆用HE染色觀察模型組與對(duì)照組陰道前壁組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)，免疫組化法檢測(cè)TGF-β1/Smad信號(hào)通路中重要信號(hào)蛋白

6、（TβR-Ⅱ、Smad3、Smad7）在各組大鼠陰道前壁組織中的定位表達(dá)，Western blot法檢測(cè)TβR-Ⅱ、Smad3、Smad7在SUI鼠與非SUI鼠陰道前壁組織中的表達(dá)，探討陰道前壁組織中TβR-Ⅱ、Smad3、Smad7的表達(dá)與SUI發(fā)病的相關(guān)性。
　　研究方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組：將40只雌性SD大鼠分為三組：空白對(duì)照組(10只)；自然分娩組(10只)；SUI組為模型組即自然分娩+陰道擴(kuò)張組(20只)。<

7、br>　　2.建立產(chǎn)后SUI大鼠模型：自然分娩后大鼠進(jìn)行陰道球囊擴(kuò)張。
　　3.大鼠模型檢測(cè)：噴嚏實(shí)驗(yàn)、尿墊試驗(yàn)均陽性被認(rèn)為是成功的產(chǎn)后SUI大鼠模型。
　　4.取經(jīng)實(shí)驗(yàn)成功建立的SUI大鼠與空白對(duì)照組、自然分娩組大鼠的陰道前壁組織，HE染色觀察組織形態(tài)學(xué)改變，免疫組化法檢測(cè)TGF-β1/Smad信號(hào)通路中TβR-Ⅱ、Smad3、Smad7信號(hào)蛋白的定位表達(dá)，采用Western blot法檢測(cè)TβR-Ⅱ、Smad3、Smad

8、7蛋白在SUI鼠、空白對(duì)照組和自然分娩組大鼠陰道前壁組織中的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.模型成模率：SUI組20例自然分娩后大鼠行陰道球囊擴(kuò)張術(shù)后，存活大鼠19例，經(jīng)噴嚏實(shí)驗(yàn)及尿墊試驗(yàn)證實(shí)，10例為成功的SUI模型，即產(chǎn)后SUI模型成模率為52.63%(10/19)。
　　2. HE染色結(jié)果：空白對(duì)照組大鼠陰道前壁組織中膠原纖維細(xì)長(zhǎng)，排列整齊、致密，成束狀。自然分娩組大鼠組織中膠原排列失去原有的整齊，部分膠原出現(xiàn)斷裂。

9、SUI鼠中大部分膠原碎裂，排列雜亂無章，膠原數(shù)量較空白對(duì)照大鼠與自然分娩組大鼠明顯減少。
　　3. TβR-Ⅱ的表達(dá)：
　　免疫組化染色結(jié)果顯示 TβR-Ⅱ主要表達(dá)于成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，呈淡黃色至棕黃色。TβR-Ⅱ在SUI組和自然分娩組大鼠陰道前壁組織中的表達(dá)水平均明顯高于空白對(duì)照組（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；且SUI組TβR-Ⅱ的表達(dá)水平明顯高于自然分娩組（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　

10、　4. Smad3的表達(dá)：
　　空白對(duì)照組Smad3在大鼠陰道前壁組織中的成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞及肌細(xì)胞的胞漿或胞核中大量表達(dá)；自然分娩組及SUI組大鼠陰道前壁組織中Smad3的陽性表達(dá)均較空白對(duì)照組明顯降低，胞漿呈棕黃色至淡黃色，胞核呈深黑色至淺藍(lán)色。Smad3在SUI組和自然分娩組大鼠陰道前壁組織中的表達(dá)水平均明顯低于空白對(duì)照組（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SUI組Smad3的表達(dá)水平低于自然分娩組（P<0.05），差異

11、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5. Smad7的表達(dá)：
　　空白對(duì)照組、自然分娩組及 SUI組中大鼠陰道前壁組織內(nèi)均可見Smad7的表達(dá)，其陽性表達(dá)產(chǎn)物主要定位于成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞及肌細(xì)胞的胞核或胞漿中，胞漿呈淡黃色至棕褐色，胞核呈淺藍(lán)色至深黑色。Smad7在SUI組和自然分娩組大鼠陰道前壁組織中的表達(dá)水平均明顯高于空白對(duì)照組（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；且SUI組Smad7的表達(dá)水平高于自然分娩組（P<0.05），差異具

12、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.模擬妊娠、難產(chǎn)危險(xiǎn)因素可以成功建立產(chǎn)后SUI大鼠模型。
　　2.陰道前壁組織中的膠原纖維稀少、碎裂，排列紊亂，膠原纖維結(jié)構(gòu)完整
　　性的破壞，導(dǎo)致了陰道前壁對(duì)尿道的支撐作用的改變，降低了尿道閉合壓，使SUI的發(fā)生成為可能。
　　3.TβR-Ⅱ、Smad7蛋白在自然分娩組大鼠陰道前壁組織中的表達(dá)明顯高于空白對(duì)照組，而 Smad3蛋白的表達(dá)則相反，提示妊娠分娩損傷可能與TGF