TGF-β1-Smad信號通路在產(chǎn)后壓力性尿失禁中的作用研究.pdf

1、研究背景：
　　壓力性尿失禁（stress urinary incontinence，SUI）是指腹壓增加時出現(xiàn)不自主的尿液自尿道外口溢出，但不是由膀胱逼尿肌的收縮壓或膀胱壁對尿液的張力壓所引起的，常見于膀胱、尿道膨出和陰道前壁脫垂患者。產(chǎn)后SUI（postpartum stress incontinence，PSI)是指繼發(fā)于妊娠和分娩之后出現(xiàn)的SUI，其發(fā)病率約為7％～40%，是女性SUI中最常見的類型，嚴重影響了產(chǎn)后婦女的身

2、心健康。近年來，其發(fā)病機制日益受到國內(nèi)外眾多學者的關注。
　　吊橋理論認為陰道前壁等尿道支撐組織的受損松弛是引起SUI發(fā)生的主要原因。膠原蛋白是構(gòu)成陰道前壁等尿道支撐組織中細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的重要組成部分，大量研究發(fā)現(xiàn)SUI患者盆底結(jié)締組織中I、Ⅲ型膠原含量減少，致使支持組織松馳無力，從而出現(xiàn)尿道順應性降低、尿道閉合障礙，進而導致SUI的發(fā)生。也有學者研究發(fā)現(xiàn)在SUI患者中盆底組織的I、

3、Ⅲ型膠原蛋白合成減少與TGF-β1表達下降密切相關，但具體機制尚不明確。TGF-β1是與膠原代謝關系最為密切的細胞因子，其通過與細胞膜表面的TGF-β1Ⅱ型受體（TGF-β1 receptor II，TβR-II）結(jié)合，從而活化受體調(diào)節(jié)型Smads蛋白(receptor-regulated Smads，R-Smads)。 Smads是細胞內(nèi)重要的信號傳導和調(diào)節(jié)TGF-β1的分子，它可以將 TGF-β1信號直接由細胞膜轉(zhuǎn)到入細胞核內(nèi)，當其

4、功能異常，TGF-β1信號的傳導會受到影響。Smad3是主要介導TGF-β1和活化素信號轉(zhuǎn)導的R-Smads的蛋白，其磷酸化后與受體協(xié)同型Smads形成復合物，在細胞核內(nèi)可直接與DNA結(jié)合作為轉(zhuǎn)錄因子，最后影響膠原蛋白基因的轉(zhuǎn)錄應答。Smad7通過拮抗絲氨酸/蘇氨酸激酶，與TGF-β1 I型受體（TGF-β1 receptor I， TβR-II）TβR-I緊密結(jié)合，從而使Smad3無法磷酸化，阻斷信號轉(zhuǎn)導通路，負性調(diào)節(jié)TGF-β1/S

5、mads信號傳導通路。TGF-β1/Smad信號通路與產(chǎn)后SUI關系的研究報道較少，本研究擬建立產(chǎn)后 SUI大鼠模型，探討大鼠陰道前壁組織中TGF-β1/Smad信號通路中重要信號蛋白（TβR-Ⅱ、Smad3、Smad7）的表達與SUI發(fā)病的相關性。
　　目的：
　　本研究通過陰道球囊擴張法建立產(chǎn)后SUI大鼠模型，釆用HE染色觀察模型組與對照組陰道前壁組織形態(tài)學表現(xiàn)，免疫組化法檢測TGF-β1/Smad信號通路中重要信號蛋白

6、（TβR-Ⅱ、Smad3、Smad7）在各組大鼠陰道前壁組織中的定位表達，Western blot法檢測TβR-Ⅱ、Smad3、Smad7在SUI鼠與非SUI鼠陰道前壁組織中的表達，探討陰道前壁組織中TβR-Ⅱ、Smad3、Smad7的表達與SUI發(fā)病的相關性。
　　研究方法：
　　1.實驗動物分組：將40只雌性SD大鼠分為三組：空白對照組(10只)；自然分娩組(10只)；SUI組為模型組即自然分娩+陰道擴張組(20只)。<

7、br>　　2.建立產(chǎn)后SUI大鼠模型：自然分娩后大鼠進行陰道球囊擴張。
　　3.大鼠模型檢測：噴嚏實驗、尿墊試驗均陽性被認為是成功的產(chǎn)后SUI大鼠模型。
　　4.取經(jīng)實驗成功建立的SUI大鼠與空白對照組、自然分娩組大鼠的陰道前壁組織，HE染色觀察組織形態(tài)學改變，免疫組化法檢測TGF-β1/Smad信號通路中TβR-Ⅱ、Smad3、Smad7信號蛋白的定位表達，采用Western blot法檢測TβR-Ⅱ、Smad3、Smad

8、7蛋白在SUI鼠、空白對照組和自然分娩組大鼠陰道前壁組織中的表達。
　　結(jié)果：
　　1.模型成模率：SUI組20例自然分娩后大鼠行陰道球囊擴張術后，存活大鼠19例，經(jīng)噴嚏實驗及尿墊試驗證實，10例為成功的SUI模型，即產(chǎn)后SUI模型成模率為52.63%(10/19)。
　　2. HE染色結(jié)果：空白對照組大鼠陰道前壁組織中膠原纖維細長，排列整齊、致密，成束狀。自然分娩組大鼠組織中膠原排列失去原有的整齊，部分膠原出現(xiàn)斷裂。

9、SUI鼠中大部分膠原碎裂，排列雜亂無章，膠原數(shù)量較空白對照大鼠與自然分娩組大鼠明顯減少。
　　3. TβR-Ⅱ的表達：
　　免疫組化染色結(jié)果顯示 TβR-Ⅱ主要表達于成纖維細胞和上皮細胞的胞漿內(nèi)，呈淡黃色至棕黃色。TβR-Ⅱ在SUI組和自然分娩組大鼠陰道前壁組織中的表達水平均明顯高于空白對照組（P<0.05），差異具有統(tǒng)計學意義；且SUI組TβR-Ⅱ的表達水平明顯高于自然分娩組（P<0.05），差異具有統(tǒng)計學意義。
　

10、　4. Smad3的表達：
　　空白對照組Smad3在大鼠陰道前壁組織中的成纖維細胞、上皮細胞及肌細胞的胞漿或胞核中大量表達；自然分娩組及SUI組大鼠陰道前壁組織中Smad3的陽性表達均較空白對照組明顯降低，胞漿呈棕黃色至淡黃色，胞核呈深黑色至淺藍色。Smad3在SUI組和自然分娩組大鼠陰道前壁組織中的表達水平均明顯低于空白對照組（P<0.05），差異具有統(tǒng)計學意義；SUI組Smad3的表達水平低于自然分娩組（P<0.05），差異

11、具有統(tǒng)計學意義。
　　5. Smad7的表達：
　　空白對照組、自然分娩組及 SUI組中大鼠陰道前壁組織內(nèi)均可見Smad7的表達，其陽性表達產(chǎn)物主要定位于成纖維細胞、上皮細胞及肌細胞的胞核或胞漿中，胞漿呈淡黃色至棕褐色，胞核呈淺藍色至深黑色。Smad7在SUI組和自然分娩組大鼠陰道前壁組織中的表達水平均明顯高于空白對照組（P<0.05），差異具有統(tǒng)計學意義；且SUI組Smad7的表達水平高于自然分娩組（P<0.05），差異具

12、有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　1.模擬妊娠、難產(chǎn)危險因素可以成功建立產(chǎn)后SUI大鼠模型。
　　2.陰道前壁組織中的膠原纖維稀少、碎裂，排列紊亂，膠原纖維結(jié)構(gòu)完整
　　性的破壞，導致了陰道前壁對尿道的支撐作用的改變，降低了尿道閉合壓，使SUI的發(fā)生成為可能。
　　3.TβR-Ⅱ、Smad7蛋白在自然分娩組大鼠陰道前壁組織中的表達明顯高于空白對照組，而 Smad3蛋白的表達則相反，提示妊娠分娩損傷可能與TGF