TGF-β1-SMAD信號通路在HMBA抑制K562細(xì)胞增殖中的作用.pdf

1、目的：
　　探討六亞甲基二乙酰胺(HMBA)對K562細(xì)胞的作用效果以及轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)/SMAD信號通路在此過程中所發(fā)揮的作用。
　　方法：
　　采用六亞甲基二乙酰胺(HMBA)和人慢性粒細(xì)胞白血病K562細(xì)胞株建立體外模型，采用不同濃度的HMBA溶液對K562細(xì)胞株進(jìn)行藥物處理，采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測HMBA對K562細(xì)胞株的增殖抑制程度以及這種增殖抑制作用是否存在時間劑量依賴性，如果存在時間劑量依賴

2、性則求出HMBA溶液作用于K562細(xì)胞72小時的半數(shù)抑制濃度(IC50)。采用臺盼藍(lán)染色進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來進(jìn)一步驗(yàn)證適宜濃度的HMBA溶液對K562細(xì)胞的增殖抑制效果。當(dāng)K562細(xì)胞經(jīng)過適宜濃度的HMBA溶液處理72小時以后，采用Wright染色法觀察K562細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化并且運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測其細(xì)胞周期的變化情況。同時采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測在HMBA作用于K562細(xì)胞的過程中與TGF-β1/SMAD信號通路密切相

3、關(guān)的幾種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子在基因表達(dá)上的變化情況，包括TGF-β1、SMAD3、SMAD4和EVI1基因在mRNA水平上相對表達(dá)量的變化趨勢。
　　結(jié)果：
　　MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明HMBA能夠較顯著地抑制K562細(xì)胞的增殖，并且這種增殖抑制作用能夠呈現(xiàn)出較明顯的時間劑量依賴性，即細(xì)胞增殖抑制率隨著時間逐漸延長或劑量逐漸加大而逐漸增高。HMBA作用于K562細(xì)胞72小時的半數(shù)抑制濃度(IC50)約為2 mmol/L。K562細(xì)胞經(jīng)過2

4、mmol/L的HMBA溶液作用72小時以后，臺盼藍(lán)染色和活細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了適宜濃度的HMBA溶液對K562細(xì)胞的確存在較明顯的增殖抑制效果，并且與MTT實(shí)驗(yàn)所得出的結(jié)果基本一致;Wright染色結(jié)果顯示K562細(xì)胞發(fā)生了較明顯的形態(tài)學(xué)變化并且進(jìn)一步向終末粒細(xì)胞分化;流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明K562細(xì)胞的細(xì)胞周期在一定程度上被阻滯于G0-G1期，而處于S期和G2-M期的細(xì)胞比例降低;RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在此過程中TGF-β1、SMA

5、D3和SMAD4基因在mRNA水平上的相對表達(dá)量逐漸增高，而EVI1基因在mRNA水平上的相對表達(dá)量則逐漸降低。
　　結(jié)論：
　　HMBA能夠較顯著地抑制K562細(xì)胞的增殖，并且這種增殖抑制作用能夠呈現(xiàn)出較明顯的時間劑量依賴性，即細(xì)胞增殖抑制率隨著時間逐漸延長或劑量逐漸加大而逐漸增高。用適宜濃度的HMBA溶液對K562細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)時間的處理后，在一定程度上能夠通過阻滯細(xì)胞周期來降低增殖期細(xì)胞的比例，同時能夠促進(jìn)K562細(xì)胞向