加味茵芍散含藥血清對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖及TGF-β1-Smad信號(hào)通路影響機(jī)制探討.pdf

1、肝纖維化是多種致病因素作用于肝臟，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)過(guò)度沉積，肝內(nèi)纖維結(jié)締組織異常增生，最終導(dǎo)致肝臟功能及結(jié)構(gòu)異常改變的病理過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn)，肝星狀細(xì)胞(Hepatic stellate cells，HSC)是肝纖維化過(guò)程中的效應(yīng)細(xì)胞，也是肝纖維化治療中的靶點(diǎn)細(xì)胞。而轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factorbeta1，TGF-β1)及Smads信號(hào)通路則是中醫(yī)藥

2、抗肝纖維化的主要信號(hào)傳導(dǎo)通路。在肝纖維化的發(fā)生過(guò)程中濕、熱、毒、瘀、虛等是其基本病理因素，“濕熱”、“血瘀”、“正虛”共存則是其基本病機(jī)特點(diǎn)。加味茵芍散是基于清熱祛濕活血扶正原則所立之方，集驅(qū)邪與扶正為一體。既往研究發(fā)現(xiàn)茵芍散能夠抑制鴨乙肝病毒的復(fù)制、延緩肝纖維化進(jìn)程。因此探討加味茵芍散對(duì)TGF-β1/Smad通路影響機(jī)制及對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖的影響，將為臨床肝纖維化的治療提供理論基礎(chǔ)和多種治療手段。
　　目的:本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)觀察加味

3、茵芍散藥物血清干預(yù)下肝星狀細(xì)胞增殖情況以及TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表達(dá)情況，進(jìn)一步探討清熱祛濕活血法抗肝纖維化的作用機(jī)制，為臨床肝纖維化的治療提供理論基礎(chǔ)和多種治療手段。
　　方法:選成年、雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為三組，分別給予生理鹽水、中藥煎液、己酮可可堿灌胃，喂養(yǎng)一周后，予以腹主動(dòng)脈采血，制備含藥血清。血清設(shè)置為六組，為生理鹽水血清干預(yù)組（陰性對(duì)照組）、己酮可可堿血清干預(yù)組（陽(yáng)性對(duì)照組）、空白組、加味茵芍散

4、藥物血清低劑量干預(yù)組、加味茵芍散藥物血清中劑量干預(yù)組、加味茵芍散藥物血清高劑量干預(yù)組。含藥血清干預(yù)大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)后，用MTT法檢測(cè)加味茵芍散對(duì)HSC-T6增殖的影響，并予以實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western blot檢測(cè)TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:加味茵芍散有效抑制HSC-T6增殖和TGF-β1/Smad通路中TGF-β1、Smad3的mRNA和蛋白表達(dá)，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(