丹參含藥血清對肝星狀細胞增殖的影響及其機制研究.pdf

1、目的：為研究丹參含藥血清對大鼠肝星狀細胞的增殖以及視黃酸受體的影響及其調(diào)節(jié)大鼠肝星狀細胞內(nèi)TGF-β1及細胞周期素CyclinD1的機制。
　　方法：
　　1.將30只Sprague-Dawley（SD）大鼠按照隨機數(shù)字表法分為丹參低劑量組（1.04g/kg）、中劑量組（2.08g/kg）、高劑量組（4.17g/kg）、秋水仙堿組、空白組，并分別制備含藥血清。
　　2.MTT法篩選血小板衍生生長因子BB（PDGF-BB

2、）刺激HSCs增殖的最佳作用濃度。CCK-8法檢測丹參含藥血清對肝星狀細胞增殖的影響。
　　3.體外傳代培養(yǎng)肝星狀細胞經(jīng)PDGF-BB最佳濃度誘導(dǎo)后，再給以相應(yīng)的含藥血清干預(yù)，37℃培養(yǎng)24h后收集細胞。
　　4.高效液相色譜法(HPLC)檢測血清中丹參成分，實時熒光定量PCR(qRT-PCR)測定視黃酸受體-α（RXR-α）及TGF-β1 mRNA，Western blot法檢測α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）、Ⅰ型膠原蛋

3、白（CollagenⅠ）、RXR-α蛋白及細胞周期素CyclinD1蛋白的表達情況。
　　結(jié)果：
　　1.HPLC結(jié)果顯示丹參含藥血清組色譜圖在與對照品相應(yīng)保留時間處出現(xiàn)丹參素、丹參酮IIA的色譜峰。
　　2.MTT結(jié)果顯示隨PDGF-BB濃度的逐漸增加，活細胞的數(shù)目顯著增加，而其中在PDGF-BB濃度為10ng/ml時，活細胞數(shù)目增加最為明顯。
　　3.CCK-8結(jié)果顯示與模型組比較，丹參1.04g/kg組細胞

4、存活率降低（P＜0.05）；丹參2.08g/kg組及丹參4.17g/kg組細胞存活率明顯降低（P＜0.01）。
　　4.丹參不同劑量處理組中，RXR-αmRNA及RXR-α蛋白表達量逐漸增加，而TGF-β1mRNA、α-SMA、CollgenⅠ、CyclinD1蛋白表達逐漸降低，與模型組相比有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05），且丹參中高劑量組，上述各指標變化趨勢更明顯（P<0.01）；與秋水仙堿組相比，丹參中劑量組（2.08g/kg）及