褪黑素對實驗性肝纖維化大鼠氧化應激及TGF-β1-Smad信號通路的影響.pdf

1、背景：肝纖維化是慢性肝臟疾病必經(jīng)的病理過程，其涉及細胞及分子事件眾多。近年來研究證明肝纖維化為一動態(tài)過程，經(jīng)合理治療后可以逆轉(zhuǎn)。目前研究已經(jīng)證明氧化應激及肝星狀細胞(hepatic stellate cell, HSCs)的活化在肝纖維化形成發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用。褪黑素（N-乙酰－5－甲氧色氨酸，melatonin）為腦內(nèi)松果腺體分泌的具有強大抗氧化能力的一種激素。研究證明褪黑素能改善多種急性及慢性肝臟損傷。前期研究結(jié)果顯示褪黑素

2、對肝纖維化具有一定的改善作用，且抗纖維化作用與其抗氧化作用相關。HSCs的活化在肝纖維化過程中發(fā)揮著關鍵性的作用，其中轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factorβ1, TGF-β1）是刺激HSCs活化的最重要的細胞因子。而TGF-β1主要通過細胞內(nèi)Smad蛋白發(fā)揮其促進肝纖維化的作用。研究證明抑制TGF-β1/Smad信號通路可改善肝纖維化。褪黑素抗纖維化的機制目前仍未完全清楚，本文旨在四氯化碳（carbon

3、 tetrachloride, CCl4）誘導的肝纖維化模型基礎上進一步證明褪黑素對肝纖維化的保護作用，并探討褪黑素抗纖維化作用與氧化應激及TGF-β1/Smad信號通路的關系。
　　方法：將75只雄性SD大鼠隨機分為正常組、模型組、褪黑素低劑量組（MEL-1組）、褪黑素中劑量組（MEL-2組）及褪黑素高劑量組（MEL-3組），每組15只。采用連續(xù)6周皮下注射CCl4方法制備肝纖維化大鼠模型。生化法測定大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）

4、、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性及白蛋白（ALB）含量。分光光度計法測定肝組織丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)活性及羥脯氨酸（Hyp）含量；HE染色及Van Gieson(VG)染色方法評價肝臟病理改變；免疫組化法測定及Western Blotting法測定肝組織中TGF-β1/Smad信號通路表達情況。
　　結(jié)果：與模型組比較，褪黑素各劑量組（2.5 mg/kg,5.0 mg/kg,10.0 mg/kg）大鼠血清中A

5、LT、AST活性及肝組織Hyp含量明顯降低（P<0.01），褪黑素高劑量組（10.0 mg/kg）大鼠血清ALB含量明顯升高（P<0.05）。褪黑素各劑量組（2.5 mg/kg,5.0 mg/kg,10.0 mg/kg）大鼠肝勻漿 MDA含量較模型組明顯下降（P<0.01）而肝勻漿 GPx活性較模型組明顯升高（P<0.05）。褪黑素高劑量組（10.0 mg/kg）大鼠肝臟纖維病理評分較模型組明顯下降（P<0.05）。模型組大鼠肝組織TG

6、F-β1、Smad2/3及p-Smad2/3表達量較正常組大鼠明顯增加（P<0.01），而褪黑素各劑量組（2.5 mg/kg,5.0 mg/kg,10.0 mg/kg）大鼠肝組織TGF-β1、Smad2/3及p-Smad2/3表達量較模型組明顯降低（P<0.01）；模型組大鼠肝組織Smad7表達量較正常組明顯降低（P<0.01），褪黑素各劑量組（2.5 mg/kg,5.0 mg/kg,10.0 mg/kg）肝組織Smad7表達量較模型組