孟魯司特對實驗性肺纖維化大鼠β-catenin及TGF-β1表達的影響.pdf

1、目的:觀察β-連環(huán)蛋白(β-catenin)及轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growthfactor，TGF-β1)在博來霉素(bleomycin，BLM)所致大鼠肺纖維化中的表達變化，以及孟魯司特(Montelukast)對其表達的影響。從而更深入地探討肺纖維化的發(fā)病機制，了解孟魯司特對肺纖維化的治療作用，為孟魯司特的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法:選用雄性健康清潔級SD大鼠75只，隨機分為五組，即生理鹽水組(

2、NS組)、博來霉素組（BLM組）以及小劑量孟魯司特組(A1組5mg/kg)、中劑量孟魯司特組(A2組10mg/kg)、高劑量孟魯司特組(A3組20mg/kg)，各組均為15只。除NS組外，各組大鼠氣管內(nèi)一次性注入經(jīng)生理鹽水稀釋的博來霉素溶液0.2ml(5mg/kg)，構(gòu)建肺纖維化模型，NS組大鼠予以等量生理鹽水氣管內(nèi)注入。建模后第2天起，每日同一時間分別予以各組大鼠不同藥物灌胃治療，A1組、A2組、A3組分別予以5mg/kg、10mg/

3、kg、20mg/kg孟魯司特，NS組、BLM組均予以等量生理鹽水。各組大鼠于灌胃干預(yù)后第7、14、28天均隨機處死大鼠各5只。在實驗過程中觀察大鼠的行為學表現(xiàn);觀察肺組織大體形態(tài)，留取肺組織，采用蘇木精-伊紅(HE)染色和Masson染色方法進行肺泡炎癥和肺纖維化的觀察，并進行程度評分;行支氣管肺泡灌洗，收集支氣管肺泡灌洗液(Bronchial Alveolar LavageFliud，BALF)，采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELI SA)檢

4、測大鼠肺泡灌洗液中TGF-β1的濃度;采用免疫組化方法檢測大鼠肺組織中β-catenin蛋白的表達。
　　結(jié)果:(1)動物一般情況觀察:NS組大鼠活潑好動、皮毛光亮，攝食正常，體重逐漸增加，呼吸平穩(wěn);BLM組大鼠活動減少，神情萎靡，反應(yīng)遲鈍，皮毛凌亂無光澤，攝食減少，消瘦，呼吸急促;A1組大鼠一般情況同BLM組相似;A2、A3組大鼠隨著用藥時間的延長，活動逐漸恢復(fù)，皮毛稍凌亂有光澤，攝食量逐漸增加，精神狀態(tài)亦隨之好轉(zhuǎn)，呼吸逐漸平穩(wěn)

5、。(2)NS組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常，肺泡形態(tài)完整，肺泡間隔無增厚，無炎性細胞浸潤，肺實質(zhì)無膠原纖維沉積; BLM組第7天時大鼠肺泡腔內(nèi)能看到較多炎性細胞浸潤，肺泡間隔增厚，病灶內(nèi)肺泡萎陷，肺組織纖維化不明顯;第14天肺泡炎癥仍然存在，可見炎性細胞數(shù)量下降，肺泡間隔明顯增厚，成纖維細胞增殖，可見纖維化區(qū);第28天時肺泡腔內(nèi)炎性細胞明顯減少，肺泡結(jié)構(gòu)嚴重破壞，肺間質(zhì)出現(xiàn)大量成纖維細胞，大量膠原纖維沉積，嚴重纖維化形成，BLM組各時間點肺泡炎及

6、肺纖維化程度評分與NS組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);A1組各時間點肺泡炎及肺纖維化程度均接近BLM組，評分差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);A2組、A3組肺組織肺泡結(jié)構(gòu)較完整，早期炎性浸潤及中晚期纖維化區(qū)及膠原纖維沉積程度均較BLM組和A1組明顯改善，評分差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(3)肺泡灌洗液中TGF-β1蛋白濃度:ELISA結(jié)果顯示:TGF-β1在NS組中濃度最低，與NS組相比，其他各組大鼠各時間點肺組織中TG

7、F-β1濃度均明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與BLM組相比，A1組BALF中TGF-β1濃度差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，A2、A3組各時間點TGF-β1濃度均降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);A2、A3組各時間點TGF-β1濃度較A1組均降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(4)肺組織中β-catenin的表達:免疫組化結(jié)果顯示:NS組大鼠肺組織中β-catenin有較少的表達，不同時間點均無明顯改變;其他

8、各組大鼠各時間點肺組織中β-catenin表達較NS組都明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與BLM組相比，A1組肺組織中β-catenin表達差異無統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，A2、A3組各時間點β-catenin表達均降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);A2、A3組各時間點β-catenin表達較A1組均降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(5)肺泡炎及肺纖維化程度評分與β-catenin表達之間的相關(guān)性分析:經(jīng)單因

9、素直線相關(guān)性分析，肺泡炎程度評分與β-catenin表達之間存在正相關(guān)關(guān)系，第7、14、28天r值分別為0.77、0.81、0.64(P＜0.05);肺纖維化程度評分與β-catenin表達之間亦存在正相關(guān)關(guān)系，第7、14、28天r值分別為0.68、0.74、0.70(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.本實驗通過氣管內(nèi)灌注BLM成功誘導了大鼠肺纖維化模型。2.TGF-β1、β-catenin在肺纖維化形成過程中高表達。3.孟魯司特灌