TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在術(shù)后認(rèn)知功能障礙中的作用初步研究.pdf

1、術(shù)后認(rèn)知功能障礙(Postoperative cognitive dysfunction，POCD)是患者麻醉手術(shù)后發(fā)生的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，臨床具體表現(xiàn)為記憶損傷、注意力下降、語(yǔ)言處理能力、社交能力障礙等神經(jīng)功能的改變。POCD的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，大量的研究表明，手術(shù)后引起的炎癥反應(yīng)與POCD的發(fā)生密切相關(guān)。系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)可以通過(guò)炎性介質(zhì)誘導(dǎo)中樞系統(tǒng)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，中樞系統(tǒng)炎癥反應(yīng)的發(fā)生可導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變和認(rèn)知功能障礙，但是

2、術(shù)后的炎癥反應(yīng)的來(lái)源通路尚不清楚。
　　 本文通過(guò)建立TLR4基因野生型(C3H/HeN)和TLR4基因缺陷型(C3H/HeJ)成年小鼠的部分肝切除手術(shù)創(chuàng)傷模型，通過(guò)Morris水迷宮觀察手術(shù)對(duì)兩種小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響;通過(guò)ELISA實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)小鼠外周血中TNF-α、IL-1β、IL-6三種炎癥因子的表達(dá);同時(shí)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)小鼠海馬區(qū)GFAP的表達(dá)水平，研究手術(shù)創(chuàng)傷誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠認(rèn)知功能的影響，及TLR4

3、在手術(shù)創(chuàng)傷引起的炎癥反應(yīng)中的作用。
　　 材料與方法:
　　 Morris水迷宮訓(xùn)練6天后達(dá)標(biāo)的C3H/HeN、C3H/HeJ實(shí)驗(yàn)小鼠各63只隨機(jī)分為3組，每組21只:C3H/HeN小鼠空白組（K組）、麻醉組（M組）、手術(shù)組（S組）;C3H/HeJ小鼠空白組（A組）、麻醉組（B組）、手術(shù)組（C組）。K、M、S隨機(jī)分為3個(gè)亞組(K1、K3、K7; M1、M3、M7; S1、S3、S7，n=7);A、B、C組隨機(jī)分為3個(gè)亞組

4、(A1、A3、A7; B1、B3、B7; C1、C3、C7，n=7)，分別在術(shù)后1，3，7天進(jìn)行水迷宮空間探索試驗(yàn)。空白組腹腔注射生理鹽水0.2mL;麻醉組腹腔注射枸櫞酸芬太尼0.2 mg/kg，鹽酸氯胺酮100 mg/kg麻醉;手術(shù)組麻醉后行部分肝切除手術(shù)。術(shù)后第1、3、7天空間探索試驗(yàn)結(jié)束，實(shí)驗(yàn)小鼠經(jīng)眼眶采血后，心臟灌流固定取出腦組織，10％中性甲醛中固定。
　　 結(jié)果:
　　 1.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5、　　 術(shù)后第1、3、7天空間探索試驗(yàn)，C3H/HeN和C3H/HeJ實(shí)驗(yàn)小鼠麻醉組目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比(T3)和目標(biāo)象限游行距離百分比(D3)均無(wú)顯著性改變(P＞0.05)。術(shù)后第1天，與K1、M1組相比，C3H/HeN小鼠S1組T3和D3顯著降低(P＜0.05);術(shù)后第3、7天，與K3、K7組相比，C3H/HeN小鼠S3、S7組T3和D3無(wú)顯著性差異(P＞0.05);C3H/HeJ小鼠結(jié)果與C3H/HeN一致。目標(biāo)象限停留時(shí)間百分

6、比和目標(biāo)象限游行距離百分比在C3H/HeN和C3H/HeJ兩種屬之間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。
　　 2.ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 單純麻醉因素對(duì)C3H/HeN小鼠和C3H/HeJ小鼠外周血中IL-6、IL-1β、TNF-α的表達(dá)無(wú)顯著影響(P＞0.05)。術(shù)后第1天，與K1、M1組比較，C3H/HeN小鼠S1組外周血中IL-6、IL-1β炎癥因子的表達(dá)顯著增加(P＜0.001); C3H/HeJ小鼠結(jié)果和它一致。術(shù)后

7、第3、7天，C3H/HeN小鼠S3、S7組外周血中IL-6的表達(dá)水平與K3、K7組相比有顯著性差異(P＜0.05)，IL-1β的表達(dá)與K3、K7組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05);C3H/HeJ小鼠結(jié)果與C3H/HeN一致。術(shù)后第1、3、7天，與空白組、麻醉組比較，C3H/HeN和C3H/HeJ小鼠手術(shù)組TNF-α的表達(dá)無(wú)顯著性改變(P＞0.05)。IL-6、IL-1β、TNF-α的表達(dá)在C3H/HeN和C3H/HeJ兩種屬之間均無(wú)顯著

8、差異(P＞0.05)。
　　 3.免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 單純麻醉因素對(duì)C3H/HeN和C3H/HeJ小鼠海馬區(qū)GFAP蛋白的表達(dá)無(wú)顯著性影響(P＞0.05)。術(shù)后第1天，C3H/HeN小鼠S1組海馬區(qū)GFAP蛋白平均光密度顯著高于K1、M1組(P＜0.05);術(shù)后第3、7天，C3H/HeN小鼠S3、S7組海馬區(qū)GFAP蛋白平均光密度與K3、K7組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05);C3H/HeJ小鼠的結(jié)果與它一致。G

9、FAP的表達(dá)在C3H/HeN和C3H/HeJ兩種屬之間均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1)手術(shù)創(chuàng)傷誘導(dǎo)了C3H/HeN小鼠和C3H/HeJ小鼠術(shù)后認(rèn)知功能障礙。
　　 2)手術(shù)創(chuàng)傷誘導(dǎo)了C3H/HeN和C3H/HeJ小鼠外周和中樞系統(tǒng)炎癥的產(chǎn)生。
　　 3)術(shù)后認(rèn)知功能的改變、外周和中樞系統(tǒng)炎癥的發(fā)生在C3H/HeN和C3H/HeJ兩種屬間無(wú)顯著性差異，術(shù)后認(rèn)知功能障礙和圍術(shù)期炎癥反應(yīng)