HMGB1在老齡大鼠術(shù)后認(rèn)知受損中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:1.探討麻醉和手術(shù)對(duì)老齡大鼠認(rèn)知功能的影響。
　　2.初步探討晚期炎癥因子HMGB1在老齡大鼠發(fā)生術(shù)后認(rèn)知受損中的作用。
　　方法:第一部分:①.22-23月齡雌性老齡SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(n=15)、麻醉組（A1、A3、A7麻醉后第1、3、7天，n=15/組）和手術(shù)組（S1、S3、S7手術(shù)后1、3、7天，n=15/組）。麻醉組大鼠3％異氟烷誘導(dǎo)后氣管插管，2％異氟烷維持2小時(shí)，麻醉過(guò)程監(jiān)測(cè)大鼠生命體征及氣體濃度。手

2、術(shù)組與麻醉組相同的麻醉?xiàng)l件下行脾臟切除手術(shù)，對(duì)照組單純吸入空氧混合氣體2小時(shí).②.造模前Morris水迷宮定向航行試驗(yàn)訓(xùn)練6天，第7天造模，造模后1、3、7天Morris水迷宮記憶測(cè)試試驗(yàn)測(cè)試大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力，smart junior軟件跟蹤記錄大鼠游泳的距離、潛伏期及速度。
　　第二部分:各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)每組隨機(jī)5個(gè)樣本，①.行為學(xué)測(cè)試后取血，提取血清，ELISA檢測(cè)血清中HMGB1、TNF-α、IL-1β的表達(dá)。②.灌注后取腦

3、組織IgG免疫組化法檢測(cè)海馬區(qū)血腦屏障通透性，熒光染色法檢測(cè)海馬區(qū)HMGB1表達(dá)，尼氏染色觀察海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)及數(shù)目。③.取海馬組織透射電鏡法檢測(cè)血腦屏障微觀結(jié)構(gòu)。④.取雙側(cè)海馬組織液氮凍存，凍存的右側(cè)海馬組織RT-PCR檢測(cè)HMGB1、TNF-α、IL-1β及受體RAGE的mRNA表達(dá)。⑤.凍存的左側(cè)海馬組織進(jìn)行western blot檢測(cè)HMGB1、TNF-α、IL-1β及受體RAGE的蛋白表達(dá)。SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

4、
　　結(jié)果:第一部分:手術(shù)創(chuàng)傷導(dǎo)致大鼠認(rèn)知受損，在手術(shù)后1、3天游泳距離（1天732.97±157.38cm，3天613.17±175.63cm，P＜0.001）及潛伏期（1天44.54±6.63s，3天38.3±6.25s，P＜0.001）與對(duì)照組（距離:322.36±116.88cm，潛伏期:24.7±8.63s）相比延長(zhǎng)，在單獨(dú)麻醉后1天上述指標(biāo)也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（距離557.93±187.42sP=0.003，潛伏期35.9

5、9±7.70s P=0.001）。
　　第二部分:①.手術(shù)創(chuàng)傷導(dǎo)致外周血中HMGB1在手術(shù)后1天表達(dá)上調(diào)(0.204±0.023ug/L，P=0.003)，術(shù)后3天及7天組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，TNF-α、IL-1β在各組之間無(wú)顯著差異。②.免疫組化結(jié)果顯示術(shù)后1天血腦屏障通透性增加，電鏡結(jié)果顯示術(shù)后1天血腦屏障的微觀結(jié)構(gòu)受損，而麻醉組損傷相對(duì)較輕。③.手術(shù)創(chuàng)傷導(dǎo)致海馬組織中HMGB1、TNF-α、IL-1β及受體RAGE在術(shù)后1天及3天

6、表達(dá)上調(diào)(P＜0.001)，上述指標(biāo)麻醉后1天也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。④.手術(shù)創(chuàng)傷未導(dǎo)致海馬CA1區(qū)神經(jīng)元丟失，與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:第一部分:①.麻醉、手術(shù)引起老齡大鼠術(shù)后認(rèn)知功能短期且可逆性受損。②.手術(shù)創(chuàng)傷引起老齡大鼠認(rèn)知功能受損程度相對(duì)麻醉而言更為嚴(yán)重，且持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。
　　第二部分:①手術(shù)創(chuàng)傷誘導(dǎo)老齡大鼠外周血HMGB1表達(dá)上調(diào)與POCD密切相關(guān)。②.外周血HMGB1增加可能是引起海馬區(qū)