HMGB1在卵巢癌血管生成中的作用研究.pdf

1、侵襲和轉(zhuǎn)移是卵巢癌患者死亡的重要因素,血管新生為侵襲和轉(zhuǎn)移提供基礎(chǔ),所以在此過(guò)程中起關(guān)鍵作用,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是目前已知最強(qiáng)的血管通透劑,它能導(dǎo)致癌性腹水或腫瘤間質(zhì)水腫,而且導(dǎo)致血漿、纖維等蛋白向血管外滲出,導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)的改變,從而促進(jìn)血管的形成,是重要的與惡性腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移和腹水形成相關(guān)的生長(zhǎng)因子。
　　高遷移率族蛋白B1(HMGB1)是核內(nèi)DNA結(jié)合蛋白由壞死細(xì)胞釋放,誘導(dǎo)炎癥反應(yīng),促進(jìn)組織修復(fù)和血管生成。因HM

2、GB1可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移及芽發(fā)而被定義為促血管生成因子。HMGB1誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移要求激活經(jīng)典和非經(jīng)典的NF-κB通路,這樣會(huì)導(dǎo)致CXCL12基因的轉(zhuǎn)錄。HMGB1還可以保護(hù)CXCL12免受降解,誘導(dǎo)額外的CXCL12的分泌。
　　CXCL12在血管新生中起重要作用,CXCL12上調(diào) VEGF表達(dá),而 VEGF上調(diào)CXCL12表達(dá),CXCR4-CXCL12和VEGF在促進(jìn)血管產(chǎn)生過(guò)程中有協(xié)同作用。HMGB1和CXCL12形

3、成的異元復(fù)合體,僅通過(guò)CXCR4信號(hào)通路發(fā)揮炎癥細(xì)胞募集的作用。
　　因此,我們擬通過(guò)檢測(cè)HMGB1對(duì)卵巢癌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF和趨化因子12(CXCL12)表達(dá)的影響及機(jī)制來(lái)了解是否對(duì)卵巢癌的血管新生有影響,初步探討卵巢癌中血管新生的機(jī)制。
　　第一部分卵巢癌組織中HMGB1,CXCL12,VEGF的表達(dá)。
　　目的:
　　檢測(cè)卵巢癌組織中HMGB1,CXCL12,VEGF的表達(dá)
　　方法:
　

4、　選取54例已確診為上皮性卵巢癌患者,對(duì)照組為同期因其它婦科疾病行手術(shù)切除正常卵巢組織標(biāo)本20例,通過(guò)免疫組化方法,檢測(cè)卵巢癌組織中HMGB1、CXCL12、VEGF的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　HMGB1在癌細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有淡黃色至棕褐色顆粒;CXCL12在癌細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)呈淡黃色至棕褐色;VEGF在癌細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)呈淡黃色至棕黃色。
　　結(jié)論:HMGB1、VEGF和CXCL12在

5、卵巢癌組織中均有表達(dá),且與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移有關(guān)。
　　第二部分 SKOV3,HUVECs細(xì)胞中HMGB1表達(dá)
　　目的:
　　檢測(cè)HMGB1在SKOV3,HUVECs細(xì)胞中具體表達(dá)情況。
　　方法:
　　分別提取SKOV3,HUVECs細(xì)胞總蛋白、胞漿及胞核蛋白,后利用western blot檢測(cè)HMGB1在兩者細(xì)胞中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　HMGB1不僅在SKOV3細(xì)胞有蛋白表達(dá),在HUVE

6、Cs細(xì)胞中也有蛋白表達(dá),但在SKOV3中蛋白表達(dá)高于HUVECs細(xì)胞中,HMGB1在SKOV3細(xì)胞胞漿的表達(dá)顯著高于HUVECs細(xì)胞胞漿表達(dá)(P=0.009)胞核的表達(dá)顯著高于HUVECs細(xì)胞胞核表達(dá)(P=0.000),SKOV3胞核中HMGB1蛋白的表達(dá)顯著高于其胞漿( P=0.000)。HUVECs胞核中 HMGB1蛋白的表達(dá)顯著高于其胞漿表達(dá)(P=0.026)。
　　結(jié)論:
　　MGB1在SKOV3,HUVECs細(xì)胞中

7、均有表達(dá),可能與HMGB1所處狀態(tài)的不同有關(guān)。
　　第三部分 HMGB1表達(dá)變化后對(duì)SKOV3血管生成的影響及作用機(jī)制研究
　　目的:
　　探討HMGB1在SKOV3血管生成中的作用及其機(jī)制
　　方法:
　　將構(gòu)建HMGB1真核表達(dá)質(zhì)粒和人工合成針對(duì)HMGB1基因的siRNA分別轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞,運(yùn)用Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后HMGB1,CXCL12的表達(dá)變化,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SKOV3的凋亡