脊髓HMGB1在大鼠炎性痛中的作用.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行了論述。
　　第一部分:CFA誘導(dǎo)大鼠炎性痛模型的建立與評估
　　目的:通過對大鼠熱痛覺過敏、機械痛覺過敏及自發(fā)痛行為學(xué)測試等方法,建立并評估CFA誘導(dǎo)的大鼠炎性痛敏模型。
　　方法:雄性S-D大鼠,體重180-220g,右后肢踝關(guān)節(jié)外側(cè)皮下注射CFA50μl制作大鼠炎性痛動物模型。皮下注藥后2、4、6、8、12h、1d、4d及14d觀測大鼠機械縮足閾值(mechanical paw withdra

2、wal threshold,MWT)、熱縮足反射潛伏期(paw withdrawal latency to thermal stimuli,PWTL)、壓爪實驗(paw pressure, PP)及自發(fā)痛(weight distribution)情況。
　　結(jié)果:皮下注射CFA2-3h后大鼠后爪注射側(cè)發(fā)生水腫和紅斑等炎癥反應(yīng),4-5h發(fā)生炎性痛覺過敏,1-4d達(dá)到高峰,此炎性痛持續(xù)14d。
　　結(jié)論:CFA誘導(dǎo)大鼠炎性痛模型

3、的建立成功。
　　第二部分:大鼠炎性痛模型脊髓HMGB1、TNF-α及IL-1β表達(dá)變化
　　目的:觀測CFA誘導(dǎo)大鼠炎性痛模型脊髓HMGB1、TNF-α及IL-1β表達(dá)變化。
　　方法:皮下注藥后4、12h及1、4、14d剝?nèi)≌＝M、假炎性痛組和炎性痛組大鼠L4~6脊髓,應(yīng)用免疫組化、western-blot及real time-PCR檢測脊髓HMGB1表達(dá)變化,real-time PCR檢測TNF-α及 IL-1β

4、表達(dá)變化。
　　結(jié)果:皮下注射CFA后4h HMGB1mRNA和蛋白質(zhì)水平?jīng)]有發(fā)生變化(P>0.05),注藥后12h及1、4、14d HMGB1mRNA和蛋白質(zhì)水平表達(dá)上調(diào)(P<0.05);皮下注藥后4h,TNF-αmRNA及IL-1βmRNA表達(dá)增高(P<0.05)。
　　結(jié)論:CFA誘導(dǎo)炎性痛大鼠早期脊髓部位HMGB1表達(dá)沒有發(fā)生變化,TNF-α及IL-1β在炎性痛早期表達(dá)水平增高。提示炎性因子TNF-α及IL-1β參與

5、炎性痛敏早期形成,而HMGB1可能作為晚期炎性因子參與炎性痛敏的持續(xù)和發(fā)展。
　　第三部分:預(yù)先鞘內(nèi)注射HMGB1中和抗體對大鼠炎性痛敏形成影響
　　目的:觀測預(yù)先鞘內(nèi)注射HMGB1中和抗體對大鼠炎性痛敏形成及脊髓HMGB1、TNF-α及IL-1β表達(dá)變化的影響。
　　方法:選擇鞘內(nèi)成功置管雄性SD大鼠,隨機分為假手術(shù)組(NS組);炎性痛組(IP組):炎性痛模型;IgG+IP組:鞘內(nèi)注射兔抗大鼠IgG20μg/10μl

6、,30 min后制備炎性痛模型;HMGB1中和抗體組(Ab):鞘內(nèi)注射Ab20μg/10μl,30 min后右后肢踝關(guān)節(jié)外側(cè)皮下注射NS50μl;Ab+IP組:鞘內(nèi)注射Ab20μg/10μl,30min后制備炎性痛模型。于模型制備前2 d(T0,基礎(chǔ)狀態(tài))、皮下注射藥物前(T1)和注射后4、8、12和24 h(T2~5)時進(jìn)行痛行為學(xué)測定。痛行為學(xué)測定后,取大鼠 L4~6脊髓,應(yīng)用免疫組化、western-blot及 real time

7、-PCR檢測脊髓HMGB1表達(dá)變化,real-time PCR檢測TNF-α及IL-1β表達(dá)變化。
　　結(jié)果:與NS組比較,IP組和IgG+IP組大鼠脊髓背角HMGB1、TNF-α及IL-1β表達(dá)水平上調(diào),行為學(xué)測定明顯下降(P<0.05); Ab組上述指標(biāo)與NS組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);與IP組比較,Ab+IP組脊髓背角HMGB1、TNF-α及IL-1β表達(dá)水平降低(P<0.05), T3-5時行為學(xué)測定值增高(P<0

8、.05)。
　　結(jié)論:鞘內(nèi)預(yù)先注射HMGB1中和抗體可以延緩大鼠炎性痛敏形成,降低TNF-α及IL-1β表達(dá),脊髓背角HMGB1的活化可能參與了大鼠炎性痛的形成。
　　第四部分:鞘內(nèi)注射HMGB1中和抗體對炎性痛敏大鼠抗傷害作用
　　目的:觀測不同時間點鞘內(nèi)注射HMGB1中和抗體對炎性痛敏大鼠抗傷害作用及脊髓HMGB1、TNF-α及IL-1β表達(dá)變化的影響。
　　方法:選擇鞘內(nèi)成功置管雄性SD大鼠,隨機分為假手術(shù)

9、組(NS組);炎性痛組(IP組):炎性痛模型;IP+ IgG組:制備炎性痛模型后30min、4d及14d鞘內(nèi)注射兔抗大鼠IgG20μg/10μl;HMGB1中和抗體組(Ab):后右后肢踝關(guān)節(jié)外側(cè)皮下注射 NS50μl后30min、4d及14d鞘內(nèi)注射Ab20μg/10μl;IP+Ab組:制備炎性痛模型后30min、4d及14d鞘內(nèi)注射Ab20μg/10μl。鞘內(nèi)給藥后4h時進(jìn)行痛行為學(xué)測定。痛行為學(xué)測定后,取大鼠L4-6脊髓,應(yīng)用免疫組

10、化、western-blot及real time-PCR檢測脊髓 HMGB1表達(dá)變化,real-time PCR檢測TNF-α及IL-1β表達(dá)變化。
　　結(jié)果:與NS組比較,IP組和IP+IgG組大鼠脊髓背角HMGB1造模后4d及14d表達(dá)上調(diào)(P<0.05),TNF-α及IL-1β造模后4h、4d及14d表達(dá)上調(diào)(P<0.05),行為學(xué)測定明顯下降(P<0.05);Ab組上述指標(biāo)與NS組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);與IP組