HMGB1在大鼠DCD供體移植肝中的表達(dá)及意義.pdf

1、實驗?zāi)康模?br>　　肝移植手術(shù)過程中，肝臟缺血再灌注損傷是導(dǎo)致移植肝早期無功能及急、慢性排斥反應(yīng)的重要原因。高遷移率族蛋白1(HMGB1)作為一種重要的炎癥因子，在肝臟缺血再灌注損傷中，它既可以由壞死細(xì)胞被動釋放，也可以由激活的巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞主動分泌到細(xì)胞外介導(dǎo)和參與許多炎癥反應(yīng)。本實驗通過建立大鼠DCD原位肝移植模型，研究高遷移率族蛋白B1(HMGB1)在大鼠移植肝中的表達(dá)，初步探討HMGB1與相關(guān)受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肝臟缺血再灌

2、注損傷中的作用。
　　實驗方法：
　　DCD大鼠模型建立，采用剪破膈肌誘導(dǎo)氣胸并鉗夾心底部誘導(dǎo)心臟停跳法建立。DCD大鼠供體原位肝移植模型的建立，采用改良的Kamada雙袖套法行熱缺血20分鐘DCD供肝原位移植術(shù)。
　　將100只SPF級SD雄性大鼠隨機分為假手術(shù)組（20只）、正常移植組（供受體各20只）、DCD移植組（供受體各20只）。三組實驗動物術(shù)前均經(jīng)陰莖背靜脈行全身肝素化處理。假手術(shù)組、正常肝移植組和DCD肝移

3、植組按實驗設(shè)計要求于術(shù)后1h，2h，4h，6h，12h（每個時間點處理4只）取下腔靜脈血檢測血清ALT水平，處死動物后取肝臟組織標(biāo)本，應(yīng)用RT-PCR方法檢測HMGB1、TNF-a、IL-1 mRNA表達(dá)，應(yīng)用Western Blot方法檢測HMGBⅠ蛋白表達(dá)情況及HE染色方法評估肝臟損傷程度，并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　實驗結(jié)果：
　　1、HMGB1mRNA在肝臟組織中的表達(dá)
　　HMGB1mRNA水平均顯著高于假手術(shù)組

4、(P＜0.05)，其中DCD肝移植組高于正常肝移植組(P＜0.05)，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2、HMGB1蛋白在肝臟組織中的表達(dá)
　　HMGB1蛋白水平均顯著高于假手術(shù)組(P＜0.05)，其中DCD肝移植組高于正常肝移植組(P＜0.05)，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3、細(xì)胞因子TNF-a、IL-1mRNA在肝臟組織中的表達(dá)
　　TNF-a、IL-1水平均顯著高于假手術(shù)組(P＜0.05)，其中DCD肝移植組

5、高于正常肝移植組(P＜0.05)，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4、肝功能檢測
　　實驗動物于術(shù)后1h、2h、4h、6h及12h取血清，檢測ALT水平。血清ALT水平，與假手術(shù)組相比，正常肝移植組和DCD組大鼠血清ALT水平在移植后1h、2h、4h、6h及12h均明顯升高(P＜0.05);與正常肝移植組相比，DCD組各時間點血清中ALT水平顯著升高(P＜0.05)。
　　5、各時間點肝臟的病理變化情況
　　肝移植再