HMGB1在乙型病毒性肝炎中的表達及其臨床意義.pdf

1、目的：持續(xù)的病毒復(fù)制和免疫應(yīng)答是乙肝治療的難題，而HMGB1分子是近年在感染性疾病的研究中逐漸被重視的細胞因子，已有的研究發(fā)現(xiàn)HMGB1與多種病毒性疾病的發(fā)病機制有關(guān)。本研究擬通過檢測臨床各型乙肝患者外周血HMGB1、sRAGE、IL-6含量，肝組織HMGB1、RAGE的表達與分布，并與乙肝臨床指標進行分析，以探討HMGB1對乙肝病毒復(fù)制和病理性肝損傷的可能作用，為乙肝的發(fā)病機制提供理論依據(jù)。
　　 方法：①臨床收集各型乙型病毒

2、性肝炎的外周血，運用ELISA和實時熒光定量PCR檢測HMGB1、sRAGE、IL-6及HMGB1 mRNA的表達，并與臨床指標進行相關(guān)性分析。②采集乙型病毒性肝炎患者肝組織，實時熒光定量PCR檢測HMGB1 mRNA的表達量，Western blot、免疫熒光組織化學(xué)觀察HMGB1、RAGE在肝組織細胞漿、細胞核的表達水平及分布情況，并與臨床指標進行相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果：⑴乙肝患者外周血實時熒光定量PCR結(jié)果顯示，AsC、

3、CHB-1、CHB-2、CHB-3、SH組的2-△△CT>2，HMGB1 mRNA表達水平呈逐漸上升的趨勢，這四組與control組比較，有顯著性差異;LC-1、LC-2組的2-△△CT>2，HMGB1 mRNA表達水平呈逐漸上升的趨勢，這兩組與control組比較，有顯著性差異。⑵乙肝患者外周血清HMGB1 ELISA結(jié)果顯示，AsC、CHB-1、CHB-2、CHB-3、SH組，血清HMGB1的濃度逐漸升高;AsC組與control組

4、比較，無顯著性差異(P>0.05):CHB-1組與control組比較，有顯著性差異(P＜0.05);CHB-2、CHB-3、SH組與control組比較，有顯著性差異(p＜0.01);LC-1、LC-2組與control組比較，血清HMGB1的濃度逐漸升高，有顯著性差異(p＜0.01)。⑶乙肝患者外周血清sRAGE ELISA結(jié)果顯示，AsC、CHB-1、CHB-2組，血清sRAGE的濃度逐漸減少，與control組比較，具有顯著性差

5、異(p＜0.01);CHB-3、SH組，血清sRAGE的濃度逐漸增多，與control組比較具有顯著性差異(p＜0.01);LC-1、LC-2組，血清sRAGE的濃度逐漸升高，與control組比較具有顯著性差異(p＜0.01)。⑷乙肝患者外周血清IL-6 ELISA結(jié)果顯示，AsC、CHB-1、CHB-2、CHB-3、SH組與control組比較，血清IL-6的濃度逐漸升高;在AsC組與control組比較，表達無顯著性差異(P>0.

6、05);CHB-l組與control組比較，表達有顯著性差異(P＜0.05);LC-1、LC-2組與control組比較，血清IL-6的濃度逐漸升高，表達有顯著性差異(P＜0.01)。⑸各指標Spearman秩相關(guān)分析顯示:control、AsC、CHB-1、CHB-2、CHB-3、SH、LC-1、LC-2組中外周血HMGB1與TBIL、IL-6、HBV-DNA均成正相關(guān)(r分別為0.495、0.886、0.511，P＜0.01);與P

7、TA、A、CHE均成負相關(guān)(r分別為.0.849、-0.848、-0.727，P＜0.01)。control、AsC、CHB-1、CHB-2組中外周血HMGB1與sRAGE成負相關(guān)(r為-0.873，P＜0.01);CHB-3、SH、LC-1、LC-2中外周血HMGB1與sRAGE成正相關(guān)(r為0.832，P＜0.01)。⑹乙肝患者肝組織實時定量PCR結(jié)果顯示，AsC、CHB-1、CHB-2、LC-1組的2-△△CT>2，表示這四組較c

8、ontrol組HMGB1 mRNA表達水平有顯著性差異，其中AsC、CHB-1、CHB-2組較control組，HMGB1mRNA表達水平呈逐漸上升的趨勢。⑺乙肝患者肝組織總蛋白Western blot結(jié)果顯示，在AsC、CHB-1、CHB-2、LC-1組較control組中HMGB1蛋白表達具有顯著性差異(P＜0.01)，其中，AsC、CHB-1、CHB-2比control組HMGB1蛋白表達水平逐漸升高。AsC、CHB-1、CHB-

9、2、LC-1組較control組RAGE蛋白表達水平逐漸升高，差異具有顯著性(P＜0.01)。⑻乙肝患者肝組織細胞胞漿蛋白Western blot結(jié)果顯示，在AsC、CHB-1、CHB-2、LC-1組較control組中HMGB1蛋白表達具有顯著性差異(P＜0.01)，其中，AsC、CHB-1、CHB-2比control組HMGB1蛋白表達水平逐漸升高。AsC、CHB-1、CHB-2、LC-1組較control組RAGE蛋白表達水平逐漸

10、升高，具有顯著性差異(P＜0.01)。⑼乙肝患者肝組織細胞胞核蛋白Western blot結(jié)果顯示，在AsC組較control組HMGB1蛋白表達水平增多，具有顯著性差異(P＜0.05);CHB-1、CHB-2組均較control組HMGB1蛋白表達水平增多，具有顯著性差異(P＜0.01);LC-1組較control組HMGB1蛋白表達水平增多，但無顯著性差異(P>0.05)。⑽乙肝患者肝組織總蛋白HMGB1與臨床各指標Spearman

11、秩相關(guān)分析顯示:control、AsC、CHB-1、CHB-2、LC-1組中HMGB1與TBIL成正相關(guān)(r為0.725，P＜0.01);與PTA、A、CHE均成負相關(guān)(r分別為-0.736、-0.684、-0.861，P＜0.01);與HBV-DNA無相關(guān)(r為0.008，P>0.05)。⑾乙肝患者肝組織免疫熒光組織化學(xué)觀察結(jié)果表示，各組肝組織肝細胞漿、肝細胞核都有HMGB1分布，以在肝細胞漿表達為主，control、AsC、CHB-

12、1、CHB-2組的肝細胞漿、肝細胞核HMGB1表達逐漸增多，以肝細胞漿HMGB1增多較為明顯;LC-1組肝組織肝細胞細胞漿、細胞核的HMGB1表達較control組增多，以肝細胞漿HMGB1增多較為明顯。⑿乙肝患者肝組織免疫熒光組織化學(xué)觀察結(jié)果表示，在各組肝組織肝細胞核內(nèi)幾乎無RAGE分布，RAGE主要表達在肝細胞漿與細胞膜上。RAGE在Contro1、AsC、CHB-1、CHB-2、LC-1組的表達逐漸增多。
　　 結(jié)論：①乙

13、肝患者外周血的HMGB1 mRNA和HMGB1蛋白的表達明顯高于正常對照組，且與疾病的嚴重程度有關(guān)，病情越嚴重，HMGB1的表達越多，說明HMGB1可能影響乙肝的病理性變化。②HMGB1的濃度和組織的炎癥及纖維化程度對sRAGE的表達有影響，說明HMGB1可能協(xié)同sRAGE影響乙肝炎癥反應(yīng)、乙肝后肝硬化的病理過程。③HMGB1與臨床指標TBIL成正相關(guān);與CHE、A、PTA均成負相關(guān);說明HMGB1影響肝臟的新陳代謝功能，即表明HMGB

14、1可能會成為判斷肝功能的一個新指標。④乙肝患者肝組織的HMGB1 mRNA表達水平隨著疾病的嚴重程度變化，進一步說明了HMGB1與乙肝疾病的病情變化相關(guān)。⑤乙肝患者外周血HMGB1與HBV-DNA呈正相關(guān)，但是肝組織總蛋白的HMGB1與HBV-DNA無相關(guān)性，由于HMGB1在肝細胞的胞核和胞漿中功能狀態(tài)未知，仍不能排出HMGB1與HBV復(fù)制的相關(guān)性，需進一步的研究以論證。⑥HMGB1在肝組織的細胞核、細胞漿的表達隨著疾病的類型不同有差異