卵巢癌血管生成擬態(tài)及其相關分子機制的初步研究.pdf

1、卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中位于第三位，死亡率高居婦科惡性腫瘤的首位。大量研究結果證實，卵巢癌的生長、浸潤和轉移過程都依賴于腫瘤血管的形成。從傳統(tǒng)意義上講，腫瘤血管新生有兩種方式：血管發(fā)生和血管生成。人們一直認為血管生成是腫瘤獲得血液供應的唯一途徑，直到1999年Maniotis等在研究人眼葡萄膜黑色素瘤微循環(huán)的過程中發(fā)現(xiàn)了一種全新的腫瘤血液供應模式-血管生成擬態(tài)(VM)。目前卵巢癌VM對卵巢癌患者預

2、后的影響及形成的分子機制仍不十分清楚。因此，為了觀察卵巢癌中血液供應模式并探討其與卵巢癌臨床病理資料及患者轉移和預后之間的關系，進一步闡明卵巢癌VM形成的分子機制，本研究收集了84例卵巢癌組織標本，并應用了SKOV-3和OVCAR-3兩種卵巢癌細胞系，深入探討了VEGF-a對卵巢癌細胞侵襲、遷移和VM形成的影響，及VEGF-a對卵巢癌VM形成中的EphA2/MMPs信號傳導途徑的影響。主要研究內容包括如下三部分： 卵巢癌的血液供

3、應模式及其與臨床病理特征的關系。本部分實驗觀察到在卵巢癌組織中存在內皮依賴性血管、馬賽克血管(MBV)和VM三種血液供應模式。在本部分實驗中，84例卵巢癌組織標本按照有無VM被分為兩組，其中VM(+)組36例，VM(-)組48例。結果表明卵巢癌VM形成的機率與卵巢癌的臨床FIGO分期、有無轉移、組織學類型和病理學分級密切相關(P<0.01)，而與患者的年齡、腫瘤的大小以及有無腹水無關(P>0.05)。即卵巢癌VM形成的機率隨著腫瘤分化程

4、度降低，腫瘤惡性程度升高，而明顯增高。VM結構的特殊性促進了腫瘤細胞的血道轉移，VM(+)組的卵巢癌患者出現(xiàn)轉移的機率明顯大于VM(-)組，Kaplan-Meier生存分析結果表明其預后比VM(-)組患者的預后要差，兩者之間的差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，說明VM可以作為評價卵巢癌患者預后的一個重要指標。 細胞因子對卵巢癌細胞侵襲、遷移能力和VM形成及其相關信號分子表達的影響。免疫組化染色結果顯示VM(+)組VEGF陽性表

5、達率明顯高于VM(-)組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。體外侵襲實驗表明VEGF-a能夠明顯增強卵巢癌細胞的體外侵襲能力。劃痕實驗結果表明：卵巢癌細胞經細胞因子誘導后，其遷移能力明顯增強。免疫組化染色結果顯示VM(+)組和VM(-)組卵巢癌組織中的EphA2陽性表達率存在差異，VM(+)組EphA2陽性表達率明顯高于VM(-)組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Real-timePCR和Westernblot實驗結果表明：VEGF

6、-a組卵巢癌細胞的EphA2和VE-cadherinmRNA和蛋白水平表達均明顯高于不能形成網(wǎng)絡樣結構的對照組，提示EphA2和VE-cadherin可能是卵巢癌VM形成過程中的重要分子。體外實驗表明：VEGF-a組卵巢癌細胞，其MMP-2和MMP-9的活性均明顯增強，與細胞的侵襲和遷移能力呈正相關，且該組細胞在三維培養(yǎng)中能形成明顯的VM樣網(wǎng)狀結構。這說明VEGF-a能明顯增加卵巢癌細胞及間質細胞的金屬蛋白酶的分泌，通過降解基底膜和細胞

7、外基質，增強卵巢癌細胞的侵襲和遷移能力，使腫瘤細胞易于移出，有利于卵巢癌的轉移，并促進卵巢癌VM的形成。 VEGF-a在卵巢癌細胞VM形成中對EphA2/MMPs信號傳導途徑的影響。Real-timePCR和Westernblot實驗結果表明：siRNA干擾后兩種卵巢癌細胞S-組細胞EphA2的mRNA和蛋白表達水平均明顯降低，且兩種卵巢癌細胞相應組的EphA2和VE-cadherin的mRNA和蛋白表達水平基本相似。與S-組相

8、比，添加了VEGF-a的S+組卵巢癌細胞的EphA2mRNA和蛋白表達水平明顯上調(P<0.05)。明膠酶譜檢測結果表明：轉染pGCSi-EphA2質粒后兩種卵巢癌細胞MMP-2和MMP-9的活性均明顯下調，在SKOV-3細胞MMP-9的活性下調明顯，而在OVCAR-3細胞MMP-2的活性下調明顯。在siRNA干擾后，與S-組相比，添加了VEGF-a的S+組的MMP-2和MMP-9的活性表達仍略有上調，但差異無統(tǒng)計學意義。三維培養(yǎng)結果顯

9、示：培養(yǎng)10天時在S+組，即便是SiRNA干擾了EphA2的表達，但由于在培養(yǎng)基中添加了VEGF-a，仍能觀察到明顯的網(wǎng)絡樣結構形成。在S-組未觀察到明顯的卵巢癌細胞彼此連接形成的網(wǎng)絡樣結構。 綜上所述，本研究觀察到卵巢癌中存在內皮依賴性血管、MBV和VM三種血液供應模式，且具有VM的卵巢癌易發(fā)生轉移，預后差，生存期短于無VM的卵巢癌患者。卵巢癌形成VM的能力與其組織學分級有關，分化程度越低形成VM的能力越強。VEGF-a能明顯