卵巢癌血管生成擬態(tài)及其相關(guān)分子機(jī)制的初步研究.pdf

1、卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中位于第三位，死亡率高居?jì)D科惡性腫瘤的首位。大量研究結(jié)果證實(shí)，卵巢癌的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過程都依賴于腫瘤血管的形成。從傳統(tǒng)意義上講，腫瘤血管新生有兩種方式：血管發(fā)生和血管生成。人們一直認(rèn)為血管生成是腫瘤獲得血液供應(yīng)的唯一途徑，直到1999年Maniotis等在研究人眼葡萄膜黑色素瘤微循環(huán)的過程中發(fā)現(xiàn)了一種全新的腫瘤血液供應(yīng)模式-血管生成擬態(tài)(VM)。目前卵巢癌VM對(duì)卵巢癌患者預(yù)

2、后的影響及形成的分子機(jī)制仍不十分清楚。因此，為了觀察卵巢癌中血液供應(yīng)模式并探討其與卵巢癌臨床病理資料及患者轉(zhuǎn)移和預(yù)后之間的關(guān)系，進(jìn)一步闡明卵巢癌VM形成的分子機(jī)制，本研究收集了84例卵巢癌組織標(biāo)本，并應(yīng)用了SKOV-3和OVCAR-3兩種卵巢癌細(xì)胞系，深入探討了VEGF-a對(duì)卵巢癌細(xì)胞侵襲、遷移和VM形成的影響，及VEGF-a對(duì)卵巢癌VM形成中的EphA2/MMPs信號(hào)傳導(dǎo)途徑的影響。主要研究?jī)?nèi)容包括如下三部分： 卵巢癌的血液供

3、應(yīng)模式及其與臨床病理特征的關(guān)系。本部分實(shí)驗(yàn)觀察到在卵巢癌組織中存在內(nèi)皮依賴性血管、馬賽克血管(MBV)和VM三種血液供應(yīng)模式。在本部分實(shí)驗(yàn)中，84例卵巢癌組織標(biāo)本按照有無VM被分為兩組，其中VM(+)組36例，VM(-)組48例。結(jié)果表明卵巢癌VM形成的機(jī)率與卵巢癌的臨床FIGO分期、有無轉(zhuǎn)移、組織學(xué)類型和病理學(xué)分級(jí)密切相關(guān)(P<0.01)，而與患者的年齡、腫瘤的大小以及有無腹水無關(guān)(P>0.05)。即卵巢癌VM形成的機(jī)率隨著腫瘤分化程

4、度降低，腫瘤惡性程度升高，而明顯增高。VM結(jié)構(gòu)的特殊性促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的血道轉(zhuǎn)移，VM(+)組的卵巢癌患者出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的機(jī)率明顯大于VM(-)組，Kaplan-Meier生存分析結(jié)果表明其預(yù)后比VM(-)組患者的預(yù)后要差，兩者之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明VM可以作為評(píng)價(jià)卵巢癌患者預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)。 細(xì)胞因子對(duì)卵巢癌細(xì)胞侵襲、遷移能力和VM形成及其相關(guān)信號(hào)分子表達(dá)的影響。免疫組化染色結(jié)果顯示VM(+)組VEGF陽性表

5、達(dá)率明顯高于VM(-)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。體外侵襲實(shí)驗(yàn)表明VEGF-a能夠明顯增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞的體外侵襲能力。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：卵巢癌細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)后，其遷移能力明顯增強(qiáng)。免疫組化染色結(jié)果顯示VM(+)組和VM(-)組卵巢癌組織中的EphA2陽性表達(dá)率存在差異，VM(+)組EphA2陽性表達(dá)率明顯高于VM(-)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Real-timePCR和Westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：VEGF

6、-a組卵巢癌細(xì)胞的EphA2和VE-cadherinmRNA和蛋白水平表達(dá)均明顯高于不能形成網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)的對(duì)照組，提示EphA2和VE-cadherin可能是卵巢癌VM形成過程中的重要分子。體外實(shí)驗(yàn)表明：VEGF-a組卵巢癌細(xì)胞，其MMP-2和MMP-9的活性均明顯增強(qiáng)，與細(xì)胞的侵襲和遷移能力呈正相關(guān)，且該組細(xì)胞在三維培養(yǎng)中能形成明顯的VM樣網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。這說明VEGF-a能明顯增加卵巢癌細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞的金屬蛋白酶的分泌，通過降解基底膜和細(xì)胞

7、外基質(zhì)，增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力，使腫瘤細(xì)胞易于移出，有利于卵巢癌的轉(zhuǎn)移，并促進(jìn)卵巢癌VM的形成。 VEGF-a在卵巢癌細(xì)胞VM形成中對(duì)EphA2/MMPs信號(hào)傳導(dǎo)途徑的影響。Real-timePCR和Westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：siRNA干擾后兩種卵巢癌細(xì)胞S-組細(xì)胞EphA2的mRNA和蛋白表達(dá)水平均明顯降低，且兩種卵巢癌細(xì)胞相應(yīng)組的EphA2和VE-cadherin的mRNA和蛋白表達(dá)水平基本相似。與S-組相

8、比，添加了VEGF-a的S+組卵巢癌細(xì)胞的EphA2mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)(P<0.05)。明膠酶譜檢測(cè)結(jié)果表明：轉(zhuǎn)染pGCSi-EphA2質(zhì)粒后兩種卵巢癌細(xì)胞MMP-2和MMP-9的活性均明顯下調(diào)，在SKOV-3細(xì)胞MMP-9的活性下調(diào)明顯，而在OVCAR-3細(xì)胞MMP-2的活性下調(diào)明顯。在siRNA干擾后，與S-組相比，添加了VEGF-a的S+組的MMP-2和MMP-9的活性表達(dá)仍略有上調(diào)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三維培養(yǎng)結(jié)果顯

9、示：培養(yǎng)10天時(shí)在S+組，即便是SiRNA干擾了EphA2的表達(dá)，但由于在培養(yǎng)基中添加了VEGF-a，仍能觀察到明顯的網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)形成。在S-組未觀察到明顯的卵巢癌細(xì)胞彼此連接形成的網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)。 綜上所述，本研究觀察到卵巢癌中存在內(nèi)皮依賴性血管、MBV和VM三種血液供應(yīng)模式，且具有VM的卵巢癌易發(fā)生轉(zhuǎn)移，預(yù)后差，生存期短于無VM的卵巢癌患者。卵巢癌形成VM的能力與其組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，分化程度越低形成VM的能力越強(qiáng)。VEGF-a能明顯