HMGB1與卵巢癌疾病診斷及疾病進(jìn)展的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　高遷移率族蛋白(HMGB1)作為炎癥反應(yīng)因子，在敗血癥、關(guān)節(jié)炎等疾病中都發(fā)揮促炎作用。最近研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1在多種腫瘤中高表達(dá)，對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)、遷移、侵襲發(fā)揮重要作用。本研究探討高遷移率族蛋白(HMGB1)在上皮性卵巢癌、卵巢良性疾病及健康人血漿中的表達(dá)情況及與臨床治療的關(guān)系，通過RNA干擾抑制探討HMGB1對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響，觀察高遷移率族蛋白(HMGB1)對(duì)腫瘤血管生成的體外調(diào)節(jié)作用。
　　方

2、法:
　　1.通過ELISA方法分別檢測(cè)105例卵巢癌患者治療前及臨床緩解期，46例卵巢良性疾病患者，33例健康女性血漿中HMGB1表達(dá)水平，研究高遷移率族蛋白(HMGB1)在上皮性卵巢癌、卵巢良性疾病及健康人血清中的表達(dá)情況及與臨床治療的關(guān)系。
　　2.靶向HMGB1基因的慢病毒載體轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞SKOV3、A2780，熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效果。
　　3.利用real-time RT-PCR和Western blot方

3、法檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞中HNGB1mRNA及蛋白的沉默效果。
　　4.CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，HMGB1沉默后卵巢癌細(xì)胞增殖能力的變化。
　　5.Transwell小室模型檢測(cè)HMGB1沉默后卵巢癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的改變。
　　6.通過CCK8檢測(cè)不同濃度hrHMGB1和hrVEGF-C刺激下HUVECs細(xì)胞的體外增殖能力。
　　7.通過Transwell小室模型實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度hrHMGB1和hrVEGF-C刺

4、激下HUVECs細(xì)胞的體外遷移能力。
　　8.成管實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度hrHMGB1和hrVEGF-C刺激下HUVECs細(xì)胞的體外成管能力。
　　結(jié)果:
　　1.卵巢癌組HMGB1水平明顯高于良性腫瘤組與健康組(P＜0.01)，HMGB1水平與卵巢癌疾病分期相關(guān)，卵巢癌患者治療后血漿HMGB1明顯下降(P＜0.01)。
　　2.ShRNA沉默HMGB1的表達(dá)可以降低卵巢癌細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移能力。
　　3.H

5、MGB1可以在體外促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、成管能力，且其促進(jìn)作用呈劑量依賴關(guān)系。作為陽(yáng)性對(duì)照的VEGF-C有明顯促血管生成的作用。
　　結(jié)論:
　　1.卵巢癌患者血漿HMGB1水平較良性患者及健康人高，并隨疾病分期的升高而升高，卵巢癌患者治療緩解后血漿HMGB1下降，可以推測(cè)HMGB1與卵巢癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，血漿HMGB1的檢測(cè)有希望成為卵巢癌診斷監(jiān)測(cè)的新方法。
　　2.沉默HMGB1基因后可顯著抑制卵巢癌細(xì)胞