APE1表達(dá)與卵巢癌鉑類耐藥相關(guān)性的初步研究.pdf

1、卵巢癌是嚴(yán)重威脅婦女健康的常見(jiàn)惡性腫瘤，死亡率在女性生殖器惡性腫瘤中占第1位。由于難于早期發(fā)現(xiàn)，近15年來(lái)，在手術(shù)和輔助化療的綜合治療下，卵巢癌患者5年生存率一直徘徊于30％～50％之間。卵巢癌對(duì)鉑類化療藥物的耐藥是影響化療效果，造成腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡率高居不下的重要原因。明確卵巢癌耐藥的分子機(jī)制，尋找有效的耐藥逆轉(zhuǎn)劑或有效的治療靶標(biāo)已成為國(guó)內(nèi)外婦科腫瘤學(xué)界密切關(guān)注的研究熱點(diǎn)。
　　脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶（apurinic/a

2、pyrimidinic endonuclease，APE1）又稱氧化還原因子-1（redoxfactor-1，ref-1）它是人類細(xì)胞中唯一修復(fù)DNAAP位點(diǎn)的核酸內(nèi)切酶，并能通過(guò)氧化還原機(jī)制調(diào)節(jié)多種轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合活性及下游靶基因表達(dá)。受其調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子包括與細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)化和凋亡相關(guān)的重要因子，如NF-κB，AP-1，p53等。而這些轉(zhuǎn)錄因子與腫瘤放化療抵抗密切相關(guān)。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)卵巢上皮性癌初治患者手術(shù)切除

3、標(biāo)本和卵巢癌順鉑敏感株A2780細(xì)胞、順鉑耐藥株CP70細(xì)胞中APE1的表達(dá)，分析APE1與卵巢癌鉑類耐藥之間的關(guān)系，應(yīng)用siRNA技術(shù)，觀察抑制APE1表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞化療敏感性的影響，探討APE1參與卵巢癌細(xì)胞耐藥的機(jī)制，為卵巢癌逆轉(zhuǎn)鉑類耐藥性提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　研究目的：
　　1.探討APE1基因在卵巢上皮性癌中的表達(dá)與臨床病理因素及鉑類耐藥之間的關(guān)系，以確證APE1為卵巢癌治療潛在的分子靶點(diǎn)；
　　2.

4、探討以APE1基因與卵巢癌鉑類耐藥的相關(guān)性及其在卵巢癌鉑類耐藥機(jī)制中的作用；
　　3.APE1基因“敲除”對(duì)卵巢癌細(xì)胞耐藥性的影響及其作用機(jī)制。
　　研究?jī)?nèi)容和方法：
　　1.采用免疫組化檢測(cè)卵巢上皮性癌組織APE1蛋白表達(dá)，分析APE1表達(dá)與卵巢癌臨床病理因素的關(guān)系。
　　2.免疫組化、westernblot檢測(cè)卵巢癌順鉑敏感株A2780細(xì)胞、順鉑耐藥株CP70細(xì)胞中APE1蛋白表達(dá)及定位情況；westernb

5、lot檢測(cè)順鉑處理后A2780和CP70細(xì)胞中APE1蛋白表達(dá)及定位的變化，分析APE1表達(dá)與卵巢癌鉑類耐藥性的相關(guān)性。
　　3.MTT法檢測(cè)Ad5/F35-APE1siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染抑制APE1蛋白表達(dá)后A2780和CP70細(xì)胞對(duì)順鉑化療敏感性的改變；TUNEL法檢測(cè)抑制APE1蛋白表達(dá)對(duì)順鉑誘導(dǎo)的A2780和CP70細(xì)胞凋亡影響。
　　研究結(jié)果：
　　1.卵巢上皮癌組織APE1表達(dá)與病理類型、細(xì)胞學(xué)分級(jí)等腫瘤的惡性

6、生物學(xué)行為有關(guān)(P<0.05)。APE1表達(dá)強(qiáng)度和亞細(xì)胞定位均與以鉑類為基礎(chǔ)化療的藥物敏感性相關(guān)。
　　2.CP70細(xì)胞的APE1蛋白表達(dá)的水平較A2780細(xì)胞高，A2780細(xì)胞中APE1表達(dá)以核表達(dá)為主，而在CP70細(xì)胞中呈核漿共表達(dá)。順鉑處理A2780和CP70細(xì)胞后，APE1蛋白表達(dá)呈劑量和時(shí)間依賴性增強(qiáng)。
　　3.Ad5/F35-APE1siRNA對(duì)卵巢上皮性癌順鉑化療敏感性的影響：
　?。?）感染Ad5/F3

7、5-APE1siRNA后，兩種卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性明顯增強(qiáng)。40MOI的Ad5/F35-APE1siRNA感染細(xì)胞后，A2780細(xì)胞和CP70細(xì)胞IC50分別為6.60μM和39.73μM，較對(duì)照組分別下降了61.89％和41.47％。
　?。?）Ad5/F35-APE1siRNA感染A2780細(xì)胞和CP70細(xì)胞后，順鉑誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞凋亡明顯增多。Ad5/F35-APE1siRNA40MOI時(shí)，A2780細(xì)胞和CP70細(xì)胞凋

8、亡指數(shù)為(42.16±3.61)％和(36.11±3.81)％，分別是DDP組的3.57倍、3.87倍，有顯著差異(p＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.APE1表達(dá)水平和亞細(xì)胞定位與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，APE1對(duì)卵巢癌的鉑類化療敏感性和預(yù)后有一定提示作用。
　　2.APE1在順鉑敏感細(xì)胞和耐藥細(xì)胞中蛋白表達(dá)強(qiáng)度和亞細(xì)胞定位不同，順鉑誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞APE1蛋白表達(dá)呈劑量和時(shí)間依賴性增強(qiáng)，提示APE1在卵巢癌順鉑耐