HLA-G與卵巢癌的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：人類白細(xì)胞抗原G(human leukocyte antigen-G，HLA-G)屬于非經(jīng)典的HLA-I類分子，最早在胎盤絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，其在母胎免疫耐受中的作用已得到證實(shí)。在過去的幾年里，HLA-G的研究已從單純的生殖領(lǐng)域擴(kuò)展到了器官移植、自體免疫性疾病和腫瘤研究等領(lǐng)域。HLA-G與腫瘤的免疫逃逸已成為腫瘤學(xué)領(lǐng)域備受關(guān)注的焦點(diǎn)。 卵巢癌是常見的婦科惡性腫瘤之一。卵巢癌腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)及以鉑類為主的聯(lián)合化療是目前卵巢

2、癌的主要治療手段。由于卵巢癌具有發(fā)現(xiàn)晚，手術(shù)不易徹底，術(shù)后易復(fù)發(fā)的特點(diǎn)，故其五年生存率仍較低。因此，尋找對(duì)卵巢癌有效的治療藥物是提高患者生存期的關(guān)鍵。該研究目的在于探討HLA-G與卵巢癌免疫逃逸的關(guān)系，從下調(diào)HLA-G的表達(dá)，抑制其參與腫瘤免疫逃逸的角度尋求治療藥物和方案。 方法： 1.采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)50例卵巢癌組織、30例良性卵巢腫瘤及10例正常卵巢組織中HLA-G

3、mRNA和蛋白的表達(dá)。 2.體外培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞OVCAR3，建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型。 3.待腫瘤生長(zhǎng)至接種后第二周，腫瘤界限清楚后，將28只裸鼠隨機(jī)分為4組，每組7只。分別為對(duì)照組、順鉑組、米非司酮組和聯(lián)合用藥組。 4 實(shí)驗(yàn)過程中注意觀察裸鼠的飲食、活動(dòng)、反應(yīng)等情況。記錄各組裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)情況，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線，計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制率。 5 采用RT-PCR技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組裸鼠移植瘤標(biāo)本HLA-

4、G mRNA和蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1.50例卵巢癌、30例良性卵巢腫瘤及10例正常卵巢組織RT-PCR檢測(cè)結(jié)果：惡性組HLA-G mRNA的陽性表達(dá)率為92.00％，良性組為66.67％，正常組為60.00％，惡性組陽性表達(dá)率高于良性組和正常組(分別為p<0.05，p<0.05)。HLA-G mRNA在不同類型的卵巢癌組織中陽性表達(dá)率無顯著性差異(p>0.05)；早期和晚期卵巢癌陽性表達(dá)率分別為76.92％、97.30

5、％，差異無顯著性(p>0.05)；HLA-G mRNA在高分化組卵巢癌中陽性表達(dá)率為62.50％，中分化組和低分化組分別為96.30％、100.00％，高分化組陽性表達(dá)率低于中、低分化組(分別為p<0.05，p<0.05)。 2.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)50例卵巢癌、30例良性卵巢腫瘤及10例正常卵巢組織HLA-G蛋白的表達(dá)：惡性組陽性表達(dá)率為64.00％，良性組和正常卵巢組織分別為16.67％、10.00％，惡性組HLA-G蛋白的陽

6、性表達(dá)率高于良性組和正常組(分別為p<0.01，p<0.01)。HLA-G蛋白在不同類型的卵巢癌組織中陽性表達(dá)率無顯著性差異(p>0.05)；早期和晚期卵巢癌陽性表達(dá)率分別為30.77％、75.68％，差異有顯著性(p<0.05)；HLA-G蛋白在不同分化程度的卵巢癌中陽性表達(dá)率分別為：高分化組37.50％，中分化組55.56％，低分化組93.71％，低分化組的陽性表達(dá)率高于高、中分化組(分別為p<0.05，p<0.05)。 3 不同治

7、療組裸鼠移植瘤體積比較：對(duì)照組、順鉑組、米非司酮組及聯(lián)合組腫瘤體積分別為6100.83±600.69mm3、3491.40±320.13 mm3、3689.30±417.66mm3、2532.55±252.56mm3，抑瘤率分別為0.00％、42.77％、39.53％、58.49％。其它三組裸鼠移植瘤體積均明顯小于對(duì)照組(均為p<0.01)；順鉑組和米非司酮組分別與聯(lián)合組比較，差異有顯著性(分別為p<0.01，p<0.01)。

8、4 RT-PCR技術(shù)檢測(cè)人卵巢癌細(xì)胞OVCAR3裸鼠移植瘤組織HLA-G mRNA的表達(dá)：對(duì)照組、順鉑組、米非司酮組和聯(lián)合組HLA-G mRNA表達(dá)量分別為1.01±0.17、0.89±0.11、0.62±0.10、0.49±0.10。順鉑組和對(duì)照組相比，差異無顯著性(p>0.05)；米非司酮組HIA-G mRNA的表達(dá)低于對(duì)照組(p<0.01)，但和聯(lián)合組比較，差異無顯著性(p>0.05)。 5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)人卵巢癌細(xì)胞OV

9、CAR3裸鼠移植瘤組織HLA-G蛋白的表達(dá)：對(duì)照組、順鉑組、米非司酮組和聯(lián)合組HLA-G蛋白表達(dá)量分別為2.38±0.43、2.29±0.35、1.26±0.31、1.08±0.25。順鉑組和對(duì)照組相比，差異無顯著性(p>0.05)；米非司酮組HLA-G蛋白的表達(dá)低于對(duì)照組(p<0.01)，但和聯(lián)合組比較，差異無顯著性(p>0.05)。 結(jié)論： 1.惡性組HLA-G抗原的陽性表達(dá)率高于良性組和正常組，卵巢癌的分化程度越低

10、，期別越晚，HLA-G抗原的表達(dá)率越高，表明HLA-G與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展和惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)，可能參與了卵巢癌的免疫逃逸。HLA-G可作為判斷預(yù)后的參考指標(biāo)，并為卵巢癌的免疫治療提供理論依據(jù)。 2.米非司酮可抑制裸鼠人卵巢癌細(xì)胞OVCAR3移植瘤的生長(zhǎng)，表明米非司酮具有抗腫瘤活性。米非司酮和順鉑聯(lián)合應(yīng)用，抑瘤效果更強(qiáng)。 3.米非司酮可下調(diào)裸鼠卵巢癌模型移植瘤組織中HLA-G的表達(dá)。米非司酮可能是通過下調(diào)HLA-G的表達(dá)解