HLA-G在卵巢癌細胞株SKOV-3中表達的實驗性研究.pdf

1、目的：人類白細胞抗原G(human leukocyte antigen-G，HLA-G)屬于非經(jīng)典的HLA-I類抗原分子(HLA-Ib)，早期的研究發(fā)現(xiàn)HLA-G的表達僅局限于母胎界面的絨毛外細胞滋養(yǎng)層，對其與妊娠的關(guān)系研究較多，后來研究發(fā)現(xiàn)在人類惡性腫瘤有所表達，HLA-G與腫瘤的關(guān)系引起人們的關(guān)注。卵巢癌細胞株SKOV-3是經(jīng)典的人類卵巢惡性腫瘤細胞株之一，本研究以絨毛膜癌細胞株JEG-3中HLA-G mRNA及蛋白的表達為陽性對照

2、，研究體外培養(yǎng)的卵巢癌細胞株SKOV-3中人類白細胞抗原G(human leucocyte antigen-G，HLA-G)的表達，以期為探討腫瘤的發(fā)生發(fā)展提供新的思路和理論依據(jù)。 方法：分別應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcriptase-polymerase chain reaction，Rt-PCR)、免疫細胞化學(xué)法及流式細胞術(shù)方法三種方法在基因和蛋白水平上檢測卵巢癌細胞株SKOV-3中HLA-G的表

3、達，以絨毛膜癌細胞株JEG-3中HLA-G mRNA及蛋白的表達為陽性對照：(1)體外培養(yǎng)的卵巢癌細胞株SKOV-3，生長到細胞密度為5×104個/ml時，收集細胞，用Trizol法提取細胞RNA，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcriptase-polymerase chain reaction，Rt-PCR)檢測卵巢癌細胞株SKOV-3中HLA-G mRNA的表達；(2)將卵巢癌細胞株SKOV-3細胞以5×10

4、4個/ml的細胞密度接種在已鋪有無菌蓋玻片的6孔板內(nèi)，37℃，5％CO2下生長48小時后取出蓋玻片，在室溫下按照免疫細胞化學(xué)試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)公司)中的步驟進行實驗，免疫細胞化學(xué)法檢測卵巢癌細胞株SKOV-3中HLA-G蛋白的表達。(3)卵巢癌細胞株SKOV-3細胞生長至5×104個/ml的細胞密度時消化收集細胞處理成單細胞懸液，處理后采用流式細胞術(shù)方法檢測卵巢癌細胞株SKOV-3中HLA-G蛋白的表達。 結(jié)果：(1)

5、Rt-PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果表明SKOV-3細胞中有HLA-G mRNA的表達，其中HLA-G1:764bp HLA-G2:488bp HLA-G3:215bp HLA-G4:491bp HLA-G5:886bp HLA-G6:610bp HLA-G7:360bp(2)以細胞表面及細胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，免疫細胞化學(xué)顯色顯示SKOV-3細胞膜及細胞漿內(nèi)有HLA-G的表達。(3)流式細胞術(shù)結(jié)果提示SKO