HLa-G基因多態(tài)性與兒童ITP的相關(guān)研究.pdf

1、背景:免疫性血小板減少癥(ITP)，是一種由自身免疫紊亂導(dǎo)致血小板生成減少、破壞增加以及功能異常而引起的出血性疾病，臨床主要表現(xiàn)為全身皮膚黏膜出血，嚴(yán)重的出現(xiàn)內(nèi)臟出血。迄今為止，免疫性血小板減少癥的發(fā)病機制仍不明確，通常認(rèn)為自身免疫系統(tǒng)紊亂與之密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，免疫性血小板減少癥的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞因子、分化抗原簇、Fc7受體、自身人白細(xì)胞抗原(HLA)基因多態(tài)性等密切相關(guān)，故其發(fā)病可能受自身遺傳因素及基因調(diào)控的影響。HLA-G是體內(nèi)一

2、個重要的免疫耐受分子，其表達(dá)使得機體對炎癥細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、病毒等失去免疫監(jiān)控及免疫殺傷。因此，我們提出假設(shè)HLA-G14bp插入/缺失的基因多態(tài)性及血漿可溶性HLA-G(sHLA-G)表達(dá)水平與兒童免疫性血小板減少癥的發(fā)生相關(guān)，旨在尋找易感基因或早期診斷指標(biāo)，通過深入研究免疫性血小板減少癥的發(fā)病機制，為該疾病的診療和預(yù)測提供理論基礎(chǔ)。
　　目的:本研究通過檢測本地區(qū)兒童免疫性血小板減少癥患者的人白細(xì)胞抗原-G(HLA-G)基因14

3、bp插入/缺失多態(tài)性及血漿可溶性HLA-G分泌水平，探討HLA-G基因多態(tài)性及sHLA-G表達(dá)水平與兒童免疫性血小板減少癥發(fā)生的相關(guān)性。
　　方法:
　　1.通過流式細(xì)胞術(shù)分析患者外周血血小板相關(guān)抗體IgA、IgG、IgM抗體的含量，結(jié)合骨髓細(xì)胞學(xué)檢查診斷免疫性血小板減少癥共103例;
　　2.通過PCR擴增及基因測序檢測103例免疫性血小板減少癥兒童及135例正常對照兒童外周血基因組DNA的HLA-G14bp插入/缺

4、失多態(tài)性、等位基因頻率，尋找兒童免疫性血小板減少癥易感的基因型。
　　3.采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對103例免疫性血小板減少癥兒童及135例正常對照兒童血漿sHLA-G分泌水平進(jìn)行檢測。
　　4.應(yīng)用SPSS16.0對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用x2檢驗對組間率進(jìn)行比較，探討HLA-G基因多態(tài)性分布頻率及血漿sHLA-G分泌水平與兒童免疫性血小板減少癥的易感風(fēng)險及疾病發(fā)生的關(guān)系。
　　研究結(jié)果:
　　1.免疫性

5、血小板減少癥疾病組患兒PAIgG、PAIgM、PAIgA血小板抗體的陽性率分別為78.6％、81.6％、18.4％，與對照組相比，PAIgG、PAIgM這兩組平均熒光強度(MFI)比較顯著差異，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.位于HLA-G基因3'非翻譯區(qū)的14bp基因型頻率分布符合遺傳學(xué)的Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(P＞0.05)，具有群體代表性。ITP疾病組中14bp插入和缺失等位基因頻率分別為61.6％

6、和38.4％，而正常對照組分別為40.0％和60.0％，兩者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=21.9，P＜0.001）。-14bp的OR值為:0.41(95％CI:0.29-0.60);+14bp的OR值為2.41(95％CI:1.67-3.49)。
　　3.ITP疾病組中14bp插入/缺失基因型-14bp/-14bp、+14bp/-14bp、+14bp/+14bp的頻率分別為13.6％、49.5％、36.9％;正常對照組分別為34.8

7、％、50.4％、14.8％。-14bp/-14bp基因型頻率在ITP疾病組中較正常對照組顯著降低（13.6％ vs34.8％，OR=0.29，P＜0.001）;而+14bp/+14bp基因型頻率在ITP疾病組中較正常對照組顯著增加（36.9％ vs14.8％，OR=3.36，P＜0.001）。
　　4.ITP疾病組患兒血漿中sHLA-G含量范圍15.1～210.1Units/ml，中位數(shù)82.0Units/ml;而對照組為8.8～

8、101.7Units/ml，中位數(shù)40.6Units/ml。兩組外周血血漿中sHLA-G水平經(jīng)Mann-Whitney U檢驗差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Z=-7.357，P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.兒童人群中免疫性血小板減少癥發(fā)病風(fēng)險與自身遺傳背景HLA-G基因14bp插入/缺失多態(tài)性密切相關(guān)，攜帶+14bp/+14bp基因型或+14bp等位基因的兒童可能更容易發(fā)生免疫性血小板減少癥(ITP)。
　　2.ITP疾病組