海南漢族、黎族HLA基因多態(tài)性的研究.pdf

1、研究背景與目的：人類白細胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)具有高度多態(tài)性，多態(tài)性是一個群體概念，指不同群體中HLA等位基因出現(xiàn)的頻率差異較大，如HLA-A2是世界范圍內絕大多數(shù)民族常見的抗原，但在巴比亞新幾內亞則不存在；又如HLA-A3、HLA-B7、HLA-DR1是白人中較為常見的抗原，但在東方人中頻率很低；東方人中常見的HLA-B46、HLA-DR9在白人中卻十分罕見。因此，HLA系統(tǒng)在人類遺傳學上成了

2、一個極好的群體標志，可作為不同種群特征性的基因標記，對研究種族起源、遷移、混雜具有重要的作用，同時HLA還是調控人體特異性免疫應答和決定疾病易感性個體差異的主要基因系統(tǒng)，研究HLA的多態(tài)性，積累不同民族的HLA基因頻率和單倍型頻率資料，有助于尋找疾病易感基因，還可根據(jù)HLA的基因頻率推算出在一定數(shù)量的供者中找到HLA相同者的機會，據(jù)此建立骨髓供者庫，多態(tài)性的復雜還可為法醫(yī)學鑒定提供依據(jù)。
　　 傳統(tǒng)的HLA多態(tài)性分析采用的是血清

3、學分型技術，但血清學分型方法因其分型血清來源困難、存在交叉反應、以及易受B淋巴細胞的純度與活力、補體質量等因素的影響，用血清學分型方法可能得出錯誤的結果，隨著分子生物學技術的發(fā)展，尤其是聚合酶鏈反應技術(PCR)的發(fā)明以來，HLA多態(tài)性的研究已進入DNA水平。
　　 因此本課題應用聚合酶鏈式反應一序列特異性引物( polymerasechain reaction-sequence specific primers，PCR-SSP

4、)技術對海南漢族、黎族HLA等位基因進行分型，從基因水平上研究這兩個民族群體的HLA多態(tài)性，闡明其HLA等位基因分布特征，為研究海南漢族、黎族的起源、遷移、混雜及與其他民族的親緣關系提供有價值的遺傳學依據(jù)，并為進一步開展HLA等位基因與海南地區(qū)高發(fā)疾病(如鼻咽癌、地中海貧血、Citrin遺傳缺陷病等)相關性、器官移植配型、法醫(yī)學等研究提供一套比較完整準確的HLA-A、B、DRB1基因頻率參數(shù)。
　　 方法：
　　 隨機分

5、別采集3140名和301名3代以上均為海南當?shù)貪h族和黎族健康、無血緣關系，年齡18～45歲的捐獻造血干細胞血樣者ACD抗凝血5ml，提取DNA，按試劑盒操作說明書擴增特異性基因片段，擴增產物經2％瓊脂糖凝膠電泳，在紫外凝膠成像系統(tǒng)觀察并記錄陽性條帶，將陽性條帶輸入試劑盒提供的分型軟件判讀分型結果，用SPSS13.0軟件統(tǒng)計分析各等位基因頻率，計算公式為基因頻率=1-(1-表型頻率)1/2，其中表型頻率是等位基因的檢出數(shù)除以檢測樣本總數(shù)，

6、并將海南漢族、黎族HLA-A、B、DRB1等位基因頻率與其他民族和地區(qū)的HLA等位基因頻率進行比較。
　　 結果：
　　 1.在海南地區(qū)漢族人群中共檢出58種HLA-A、B、DRB1等位基因。其中HLA-A等位基因17個，HLA-B等位基因28個，HLA-DRB1等位基因13個。HLA-A基因座具有較高基因頻率的等位基因有(pi>0.1000) A*11、A*02、A*24、A*33，低頻率等位基因(pi<0.0010)

7、有A*23、A*66、A*34、A*69，未檢出的等位基因有A*25、A*36。HLA-B基因座高頻率等位基因(pi>0.050)為B*40、B*15、B*13、B*46、B*58，低頻率等位基因(pi<0.0010)有B*14、B*41、B*47、B*50、B*53、B*67，未檢出的基因有B*45、B*49、B*59、B*73。DRB1*15(0.1649)、DRB1*12(0.1414)、DRB1*04(0.1336)、DRB1*

8、09(0.1287)則是HLA-DRB1座位具有較高頻率的等位基因。與國內其他漢族群體比較提示雖然有些等位基因的頻率存在顯著性差異，但海南漢族與福建漢族、廣東漢族、南方漢族、客家群體的常見HLA-A、B、DRB1等位基因頻率分布特征基本一致，A*11、B*46、B*58及DRB1*07分別呈現(xiàn)出由南向北和由北向南的遞減趨勢，提示海南漢族在HLA基因遺傳背景上歸屬于以廣東、福建漢族群體為代表的南方漢族，而與北方漢族則存在顯著差異。

9、　　 2.在301名海南黎族個體中檢出HLA-A等位基因11個，HLA-B等位基因20個，HLA-DRB1等位基因13個，其中HLA-A*11(0.3634)、A*02(0.2507)、A*33(0.1767)、A*24(0.1451)四個等位基因的頻率大于93％，是海南地區(qū)黎族群體中HLA-A基因座位的主要基因。HLA-B基因座最常見等位基因為B*58(0.1972)、B*13(0.1788)、B*40(0.1278)、B*46(0

10、.1259)。HLA-DRB1座位檢出較高頻率的等位基因有DRB1*03(0.1808)、DRB1*15(0.1667)、DRB1*16(0.1627)、DRB1*09(0.1240)。未檢出的HLA-A座位等位基因有：A*25、A*34、A*36、A*66、A*68、A*69、A*74，未檢出的HLA-B座位等位基因有：B*18、B*41、B*45、B*47、B*49. B*50. B*57、B*59. B*67、B*73、B*81。

11、與南方漢族、廣西壯族等人群比較，海南黎族HLA-A*01、A*03、A*30、A*31、B*07、B*08、B*37、B*44、DRB1*01、DRB1*07呈現(xiàn)低頻分布，而HLA-A*11、B*46、B*58則具有較高頻率，分別呈現(xiàn)由北向南和由南向北遞減趨勢，與南方漢族及南方少數(shù)民族如壯族、布依族等人群呈現(xiàn)一致性。海南黎族與南、北漢族、壯族、布依族、傣族、維族、回族人群HLA-A、B、DRB1基因頻率比較差異皆有統(tǒng)計學意義，但更接近于

12、南方漢族、壯族、布依族、傣族及回族。
　　 結論：
　　 1.海南漢族HLA等位基因分布特點提示海南漢族的群體遺傳背景總體上雖與南方漢族具有相似性，但可能在海南漢族形成的漫長過程中同時還受到北方漢族的影響，以及由于環(huán)境變化、人群遷徙融合等因素致使其HLA基因分布形成自身特點。
　　 2.海南黎族在HLA分布上屬于南方民族類型，與西南少數(shù)民族壯族、布依族、傣族具有相似的遺傳基因背景，但可能黎族在進入海南島之后，由于