HLA-DM基因多態(tài)性對(duì)SLE整體影響的研究.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種典型的自身免疫性疾病，以B淋巴細(xì)胞多克隆活化增值，大量的自身抗體產(chǎn)生，循環(huán)免疫復(fù)合物增高，補(bǔ)體降低和多器官非感染性炎癥為特點(diǎn)。從免疫學(xué)角度，SLE是針對(duì)多種自身抗原，主要為核內(nèi)抗原如：DNA、組蛋白和核小體等產(chǎn)生的自身免疫反應(yīng)。目前國(guó)內(nèi)外已經(jīng)從自身抗原的產(chǎn)生和異常(如是否為凋亡細(xì)胞的增多或者凋亡過(guò)程的異常引起；氧自由基損傷引起染色質(zhì)和核小體的異常)、

2、自身抗原的表位擴(kuò)展、抗原提呈過(guò)程相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄異常、T細(xì)胞活化信號(hào)的異常、B細(xì)胞的多克隆增生、自身抗體的產(chǎn)生、免疫復(fù)合物的形成與沉積、免疫調(diào)節(jié)和免疫耐受機(jī)制的異常等方面對(duì)SLE展開(kāi)了大量的研究，取得了很多顯著的成果。但其發(fā)病的始因究竟是免疫機(jī)制引發(fā)的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的改變，還是基因變異引起免疫機(jī)制的改變，目前還不明確。 人類主要組織相容性復(fù)合物(major histocompatibility complex，MHC)即人類白細(xì)胞抗原

3、(human leucocyte antigen，HLA)，其Ⅱ類分子除了在器官移植排斥反應(yīng)中起作用外，更重要的生物學(xué)功能是參與抗原提呈過(guò)程，識(shí)別和提呈抗原肽，進(jìn)而啟動(dòng)特異性的免疫應(yīng)答。MHC Ⅱ類分子能夠調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答能力，從而調(diào)節(jié)抗體的產(chǎn)生和免疫復(fù)合物的形成。因此，MHC Ⅱ類分子可能在SLE的發(fā)病中起重要的作用。 HLA-DM基因定位于MHCⅡ類基因區(qū)域，屬于抗原加工提呈相關(guān)基因，其編碼的HLA-DM分子在MHC

4、 Ⅱ類分子途徑的抗原提呈過(guò)程中，作為經(jīng)典的MHCⅡ類分子的分子伴侶發(fā)揮重要作用。因此HLA-DM基因被認(rèn)為是一種可能的疾病易感基因。自HLA-DM被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，已經(jīng)有HLA-DM與疾病的相關(guān)性報(bào)道，尤其是自身免疫性疾病，如：Ⅰ型糖尿病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。 國(guó)內(nèi)外的研究較多是SLE與經(jīng)典HLA-Ⅰ基因(如DR、DP及DQ等基因)多態(tài)性的相關(guān)性分析，最近的研究發(fā)現(xiàn)HLA-DM基因多態(tài)性與SLE也有一定的相關(guān)性。因目前研究結(jié)果不盡相同，

5、可能與地理位置種族及研究方法等多種因素有關(guān)，故本研究首先篩選一種可靠的檢測(cè)基因多態(tài)性的實(shí)驗(yàn)方法，最終確定應(yīng)用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性-聚合酶鏈反應(yīng)(restriction fragment length polymorphism-polymerase chain reaction，RFLP-PCRl)方法檢測(cè)HLA-DM基因的多態(tài)性，繼而分析HLA-DM基因多態(tài)性與SLE發(fā)生的相關(guān)性，及與SLE患者自身抗體、活動(dòng)性、腎損害等的相關(guān)性。以期從

6、基因水平上探討HLA-DM基因?qū)LE疾病易感性、活動(dòng)性及預(yù)后的影響。 第一部分：通過(guò)對(duì)多種檢測(cè)基因多態(tài)性的PCR方法，如序列特異性引物(sequence specitic primers，SSP)-PCR、單鏈構(gòu)象多態(tài)性(single strand conformationpolymorphism，SSCP)-PCR、RFLP-PCR等進(jìn)行比較分析，得出本研究適合應(yīng)用RFLP-PCR方法進(jìn)行分析。 第二部分：用RFLP

7、-PCR技術(shù)對(duì)SLE患者及正常人進(jìn)行HLA-DMA及HLA-DMB等位基因檢測(cè)及分型，結(jié)果共檢出HLA-DMA等位基因型4種，基因型6種；HIA-DMB等位基因型3種，基因型6種；HIA-DM單倍型29種。其中，HLA-DMB*0101/0103基因型在SLE組與對(duì)照組間的分布不同，SLE組高于健康對(duì)照組，差異有顯著性。提示HLA-DM基因多態(tài)性與SLE的發(fā)生有一定的相關(guān)性，HLA-DMB*0101/0103可能為SLE的易感基因型。

8、 第三部分：對(duì)HLA-DM基因與SLE患者自身抗體、疾病活動(dòng)性及腎損害的相關(guān)性進(jìn)行分析。 結(jié)果顯示： ①HLA-DMB*0103等位基因型的SLE患者，抗U1-RNP抗體陽(yáng)性率增加； ②HLA-DMB*0102等位基因型的SLE患者病情更易活動(dòng)，腎臟受累比例也增加，而HLA-DMB*0101等位基因型的SLE患者病情更趨穩(wěn)定，腎臟受累比例也降低； ③HLA-DMB*0101/0103基因型的SLE患