Toll樣受體9基因多態(tài)性與兒童哮喘的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：TLRs是一類(lèi)先天性免疫模式識(shí)別受體，它具有連接先天性免疫和適應(yīng)免疫的橋梁作用。TLR9的激活可誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫的Th1轉(zhuǎn)化作用，其在哮喘發(fā)病中可能有重要作用。外國(guó)有研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)其基因多態(tài)性可能與哮喘或濕疹有關(guān)，但也有研究得出相反的結(jié)論，提示TLR9多態(tài)性存在種族差異。本研究對(duì)中國(guó)兒童TLR9的單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行研究，探討其與哮喘之間的相關(guān)性：（1）檢測(cè)中國(guó)漢族兒童TLR9的單核苷酸多態(tài)性的分布情況，并分析其與哮喘易感性之間的關(guān)系；

2、（2）分析TLR9單核苷酸多態(tài)性與哮喘嚴(yán)重程度之間的關(guān)系；（3）分析TLR9單核苷酸多態(tài)性與血漿細(xì)胞因子水平的相關(guān)性；（4）分析TLR9單核苷酸多態(tài)性與血清TIgE、D1IgE和特應(yīng)質(zhì)之間的相關(guān)性。 方法：2007年4月至2008年11月收集的303例哮喘患兒（哮喘組）和139名健康對(duì)照兒童（對(duì)照組）的TLR9基因-1486和-1237位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性采用DNA直接測(cè)序法進(jìn)行測(cè)定分析。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定哮喘

3、組血漿中IFN-γ、IL-12和IL-4的水平；采用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定哮喘組血清總IgE水平，采用酶免疫熒光法檢測(cè)血清D1IgE。 結(jié)果：（1）哮喘組和對(duì)照組在擴(kuò)增的548bp長(zhǎng)度的序列中，發(fā)現(xiàn)-1486位點(diǎn)存在多態(tài)性，基因型有TT、TC和CC三種類(lèi)型，以TC型為主。-1237位點(diǎn)野生基因型為T(mén)T，該位點(diǎn)突變僅在哮喘組（1/303）和對(duì)照組（1/139）中各發(fā)現(xiàn)1例，基因型為T(mén)C。哮喘組TT、TC和CC三種基因型的頻率分別是40．3

4、%、48．2%和11．6%，等位基因T的頻率為64．4%，C為35．6%；對(duì)照組三種基因型的頻率分別是41．7%、43．9%和14．4%，等位基因T和C的頻率分別為63．7%和36．3%。兩組基因型及等位基因構(gòu)成比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2分別為1．0427和0．0391，P均>0．05）。 （2）哮喘組-1486位點(diǎn)三種基因型的哮喘嚴(yán)重程度構(gòu)成比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=14．187，P=0．007），但是TC和TT基因型比較差異無(wú)

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=1．066，P=0．587），即TC和TT基因型兒童“中、重度持續(xù)”比例較低，CC基因型哮喘患兒“中、重度持續(xù)”比例較高。 （3）哮喘組血漿IFN-γ在三種基因型患兒間的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=12．288，P=0．002），哮喘組CC基因型的血漿IFN-γ水平低于TC和TT基因型患兒；IL-12在三種基因型患兒間的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=1．801，P=0．406）；IL-4在三種基因型患兒間的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

6、義（x2=15．656，P=0．000），TC基因型的血漿IL-4最低，CC基因型的次之。 （4）哮喘組-1486位點(diǎn)三種基因型的特應(yīng)質(zhì)情況（x2=2．130，P=0．345）、1gTIgE（F=0．385，P=0．681）和D1IgE（x2=1．960，P=0．375）水平差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：（1）中國(guó)漢族兒童存在TLR9基因-1486位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性，該位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性與哮喘易感性無(wú)關(guān)。中國(guó)漢族兒童不存

7、在-1237位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性。檢測(cè)以上兩個(gè)位點(diǎn)基因型對(duì)于判斷某兒童對(duì)哮喘是否易感無(wú)參考價(jià)值。 （2）TLR9基因-1486位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性與患兒哮喘嚴(yán)重程度相關(guān)，含有CC基因型的兒童患“中、重度持續(xù)哮喘”的比例較高，而含有TC和TT基因型的兒童較低。哮喘患兒測(cè)定-1486位點(diǎn)的基因型對(duì)判斷哮喘的預(yù)后具有重要的意義。 （3）TLR9基因-1486位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性與哮喘組血漿中IFN-γ和IL-4的水平相關(guān)，與I