IFN-γ和IL-4基因多態(tài)性與兒童支氣管哮喘的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景:
　　 支氣管哮喘(bronchial asthma，BA)是兒童期最常見的慢性呼吸道疾病，病因相當(dāng)復(fù)雜，其發(fā)病機制迄今尚未完全闡明。哮喘的本質(zhì)為氣道慢性炎癥，免疫學(xué)發(fā)病機制主要為Th1/Th2反應(yīng)的失衡，Th1類細胞因子分泌不足，Th2類細胞因子產(chǎn)生增加，進而導(dǎo)致IgE合成增加，直接或間接誘導(dǎo)肥大細胞、嗜酸性粒細胞脫顆粒產(chǎn)生氣道高反應(yīng)及炎癥。干擾素-γ(Interferon-gammar，IFN-γ)、白細胞介素-4

2、(Interleukin-4，IL-4)分別作為Th1、Th2類細胞的特征性細胞因子，在哮喘發(fā)病機制中起重要作用。目前認為每類細胞因子基因的調(diào)控區(qū)和啟動子區(qū)的等位基因不盡相同，等位基因的多態(tài)性可能會影響細胞因子的合成。IFN-γ和IL-4基因是哮喘的遺傳易感基因，其基因調(diào)控區(qū)和啟動子區(qū)存在多個多態(tài)性位點，如IFN-γ基因啟動子區(qū)的-179G/T位點，第一內(nèi)含子區(qū)+874A/T位點和CA重復(fù)序列，IL-4基因啟動子區(qū)的-33C/T和-58

3、9C/T位點。目前國內(nèi)外學(xué)者多是從單個或多個基因多態(tài)性與哮喘的關(guān)系進行研究，而完整地從Th1/Th2的角度研究細胞因子基因多態(tài)性與兒童支氣管哮喘相關(guān)性，至今國內(nèi)外未見報道。況且由于人種不同及地區(qū)的差別，基因多態(tài)性分布存在很大的差異。因此我們對廣東珠江三角洲地區(qū)哮喘兒童IFN-γ基因(啟動子區(qū)-179G/T位點，第一內(nèi)含子區(qū)+874A/T位點和CA重復(fù)序列(即CAn))以及IL-4基因(啟動子區(qū)-33C/T和-589C/T位點)多態(tài)性進行

4、研究，旨在探討其與兒童哮喘易感性及血漿IFN-γ、IL-4和總IgE水平的關(guān)系。
　　 研究目的:
　　 1.探討IFN-γ基因啟動子區(qū)-179G/T位點、第一內(nèi)含子區(qū)+874A/T位點和CA重復(fù)序列的基因多態(tài)性與兒童支氣管哮喘易感性的關(guān)系。
　　 2.探討IL-4基因啟動子區(qū)-33C/T和-589C/T位點基因多態(tài)性與兒童支氣管哮喘易感性的關(guān)系。
　　 3.探討IFN-γ基因和IL-4基因多態(tài)性與哮喘患

5、者血漿IFN-γ、IL-4和總IgE水平的相關(guān)關(guān)系。
　　 研究方法:
　　 1.研究對象與分組
　　 以廣東珠江三角洲地區(qū)哮喘兒童為研究對象。隨機選擇2009.3-2010.2在中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院兒科哮喘?？崎T診就診的哮喘患兒。對照組為同期在兒科保健門診體檢的健康兒童及小兒外科病區(qū)收治的外傷、骨折等患兒。分組：哮喘組100例，其中男51例，女49例，年齡2-13(6.57±2.76)歲。對照組122例，其中

6、男70例，女52例，年齡3-14(7.46±2.94)歲。哮喘組和對照組在性別構(gòu)成、年齡分布上無顯著差異。
　　 2.實驗方法
　　 (1)采集外周靜脈血2 mL,EDTA-K2抗凝。取300μL全血提取基因組DNA；剩余全血離心后分離血漿用于檢測外周血IL-4、IFN-γ和總IgE含量。
　　 (2)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性酶切片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)檢測IFN-γ基因-179G/T位點、IL-4基

7、因-33C/T和-589C/T位點基因型。
　　 (3)利用等位基因特異性-聚合酶鏈反應(yīng)(AS-PCR)技術(shù)檢測IFN-γ基因+874A/T位點基因型。
　　 (4)毛細管電泳(CE)技術(shù)檢測IFN-γ基因CA重復(fù)序列基因型。
　　 (5)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定血漿IFN-γ、IL-4和總IgE含量。
　　 3.統(tǒng)計學(xué)方法
　　 符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((-x)±S)表示

8、，兩組間均數(shù)比較采用獨立樣本t檢驗；不符合正態(tài)分布以中位數(shù)(M)表示，兩組間比較采用Mann-Whitney秩和檢驗。計數(shù)資料用率或比表示，采用x2檢驗。所有數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件分析，顯著檢驗水準(zhǔn)為P＜0.05。
　　 結(jié)論:
　　 1.222例廣東珠江三角洲地區(qū)兒童IFN-γ基因啟動子區(qū)-179位點均為GG純合基因型，IFN-γ基因-179位點可能與哮喘易感性無關(guān)聯(lián)。
　　 2.IFN-γ基因+87

9、4A/T位點和CA重復(fù)序列多態(tài)性可能與哮喘易感性無關(guān)聯(lián)。
　　 3.IL-4基因-33C/T和-589C/T位點多態(tài)性與哮喘易感性密切相關(guān)，TT基因型和T等位基因在哮喘組比例明顯高于對照組，TT基因型可能為哮喘的易感基因型，攜帶T等位基因會增加患哮喘的風(fēng)險。
　　 4.哮喘患兒血漿IL-4和總IgE水平高于對照組兒童，而IFN-γ水平低于對照組兒童，提示哮喘患者Th1/Th2反應(yīng)失衡，以Th2反應(yīng)占優(yōu)勢。