HLA-G與滋養(yǎng)細胞侵襲及子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病相關(guān)性的研究.pdf

1、胚胎著床的過程是生命中最復雜和最神秘的過程之一，其調(diào)控機理是生物學家長期以來不懈探索的重大課題。自1829年Lobstein等提出腫瘤胚胎性起源概念以來，胚胎植入與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移生物學行為的相似性研究日益受到重視。旺盛增殖分裂的受精卵定向地向子宮內(nèi)遷移，與接受態(tài)的子宮內(nèi)膜細胞進行對話，進而啟動粘附、遷移、基質(zhì)降解、侵蝕母體血管及新生血管生成等信號級聯(lián)反應(yīng)，生理性侵襲(physiologicalinvasion)子宮內(nèi)膜并增殖分化形成胎兒及

2、其附屬物，因此，認為“假惡性”的囊胚滋養(yǎng)層細胞及惡性腫瘤細胞在細胞增殖分化、侵襲信號轉(zhuǎn)導通路、血管侵蝕和新生血管形成、免疫逃逸及細胞凋亡等諸多方面具有驚人的相似性。但胚胎滋養(yǎng)層細胞僅侵襲母體子宮內(nèi)膜的上三分之一左右，即胚胎滋養(yǎng)細胞的侵襲是有節(jié)制性的侵襲。 滋養(yǎng)細胞的侵襲行為是由一個復雜的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)精確調(diào)控的，實際上是在甾體激素的協(xié)同作用下，通過子宮和胚胎所表達的各種細胞因子、生長因子、血管發(fā)生因子、蛋白酶類激活/抑制因子及細胞凋亡

3、調(diào)控因子等，在時間和空間上相互協(xié)同作用下完成的，但對此過程的了解尚處于起始階段。 在胚胎植入過程中細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)的降解極為關(guān)鍵，是成功妊娠的必要條件。基質(zhì)金屬蛋白酶((matrixmetalloproteinases，MMPs)是一類鋅離子依賴性內(nèi)肽酶，是降解細胞外基質(zhì)的最重要酶，幾乎能降解所有的ECM成份。MMPs是胚泡滋養(yǎng)層侵入性標志，其蛋白表達與滋養(yǎng)層細胞的最大低濃度的E2+P

4、4組(1nM)HLA-G蛋白的表達高于同濃度的P4組(p＜0.05)而低于相同濃度的E2組(p＜0.01)；濃度為10nM和100nM時HLA-G表達與P4組無明顯差異(p＞0.05)，濃度為1000nM時，HLA-G表達顯著高于單純E2及P4組(p＜0.01)。 [結(jié)論] 1.雌二醇上調(diào)EVT表達HLA-G蛋白，上調(diào)作用與其濃度關(guān)系密切，當E2濃度小于100nM時，隨著濃度的增加E2對HLA-G蛋白的上調(diào)作用逐漸減弱；

5、當E2濃度高于100nM時，上調(diào)作用則呈濃度依賴性。 2.上調(diào)EVT表達HLA-G蛋白，且呈量效關(guān)系。 3.E2、P4聯(lián)合作用能上調(diào)HLA-G蛋白的表達。當E2及P4的濃度均低于100nM時，雌孕激素聯(lián)合組HLA-G表達與單純雌激素或孕激素組無明顯差異，提示生理濃度的雌激素和孕激素對HLA-G調(diào)節(jié)為拮抗作用；當E2和P4的濃度均較高(1000nM)時，E2+P4組HLA-G蛋白表達高于單純雌激素、孕激素組，提示高濃度E2

6、和P4對HLA-G的表達呈協(xié)同作用。 第四部分HLA-G蛋白及基因在子宮內(nèi)膜異位癥在位和異位內(nèi)膜中的表達 [目的] 探討人類白細胞抗原G(HLA-G)與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病的關(guān)系。 [方法] 1.分組：子宮腺肌癥在位內(nèi)膜38例，異位內(nèi)膜38例；卵巢子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜30例，異位內(nèi)膜30例；對照組子宮肌瘤在位內(nèi)膜20例。 2.應(yīng)用免疫組化法和原位雜交法檢測HLA-G蛋白和基因在子宮腺肌癥、

7、卵巢子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜，子宮肌瘤患者子宮內(nèi)膜中的表達。 3.統(tǒng)計學分析統(tǒng)計學分析應(yīng)用SPSS13.0軟件，計數(shù)資料用秩和檢驗，其中多組計數(shù)資料用Kruskal-Wallis檢驗，兩兩比較用Mann-Whitney檢驗。 [結(jié)果] 1.HLA-G蛋白的表達(1)EM(AM和OEM)組在位和異位內(nèi)膜：HLA-G蛋白表達于EM在位和異位內(nèi)膜腺上皮的細胞膜和細胞漿，表達以“++～+++”為主，間質(zhì)細胞中無表

8、達，組間對比差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)；兩組在位內(nèi)膜的分泌期和增生期比較均無明顯差異(p＞0.05)；HLA-G蛋白的表達強度與臨床分期無相關(guān)性(p＞0.05)。(2)對照組：HLA-G蛋白在增生期和分泌期均不表達或呈弱表達，顯著低于與AM、OEM組在位內(nèi)膜(p＜0.05)。 2.HLA-GmRNA的表達(1)HLA-GmRNA表達于AM和OEM的在位和異位內(nèi)膜腺上皮的細胞漿，表達以“++～+++”為主，間質(zhì)細胞中無表達，

9、組間對比差異無顯著性(p＞0.05)。(2)HLA-GmRNA在對照組不表達或呈弱表達，顯著低于AM、OEM組在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜(p＜0.01)。 [結(jié)論] 1.HLA-G蛋白及基因在子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織中呈強表達，明顯高于對照組，結(jié)果提示，HLA-G可能與EM的發(fā)病有關(guān)。 2.HLA-G蛋白及基因在子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜亦呈強表達，與在異位內(nèi)膜的表達無明顯差異，提示EM的異位和在位內(nèi)膜可能具有相同的生

10、物學特性，具有HLA-G高表達的在位內(nèi)膜可能是發(fā)生EM的高危人群，可以通過檢測在位內(nèi)膜HLA-G的表達預測發(fā)生EM的風險，為診斷提供信息。 3.HLA-G蛋白在AFS-r不同分期的表達無明顯差異，在增生期和分泌期子宮內(nèi)膜的表達無差異，提示HLA-G與子宮內(nèi)膜異位癥的臨床分期無明顯相關(guān)性，且HLA-G在EM的高表達貫穿于整個月經(jīng)周期，不受激素變化的影響。 [全文小結(jié)] 1.HLA-G蛋白主要表達于母胎介面具有侵襲性

11、的絨毛外滋養(yǎng)層細胞；侵蝕性葡萄胎的滋養(yǎng)細胞具有更強的侵襲力，HLA-G蛋白的表達亦最強。以上結(jié)果強烈提示：HLA-G的作用并不局限于免疫保護，其表達還與滋養(yǎng)細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)。 2.HLA-G反義寡核苷酸能夠抑制HLA-G基因和蛋白的表達，其可以通過下調(diào)MMP(MMP-2、MMP-9)的表達；上調(diào)TIMP(TIMP-1、TIMP-3)、PAI-1的表達，使MMP/TIMP、uPA/PAI-1的調(diào)控失衡，同時下調(diào)VEGF的表達，

12、從而降低絨毛外滋養(yǎng)細胞的侵襲能力。 3.本研究首次報道，E2上調(diào)HLA-G蛋白的表達；生理濃度的E2、P4對HLA-G的調(diào)節(jié)呈拮抗作用，高濃度E2和P4則以協(xié)同作用調(diào)節(jié)HLA-G的表達。P4上調(diào)HLA-G蛋白的表達，且呈劑量依賴性。 4.本研究首次發(fā)現(xiàn)HLA-G蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜呈強表達，而非EM患者的子宮內(nèi)膜則無表達或呈弱表達。結(jié)果提示，具有HLA-G高表達的在位內(nèi)膜可能是發(fā)生EM的高危人群，可以通