青藤堿對小鼠巨噬細胞TLR4-NF-κB信號通路作用的研究.pdf

1、目的：青藤堿對許多自身免疫性疾病的炎癥反應都具有保護作用，可用于腎病、類風濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡等機體免疫相關(guān)性疾病的治療。潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerativ e colitis,UC）的發(fā)病也和自身免疫紊亂密切相關(guān)，而關(guān)于青藤堿對潰瘍性結(jié)腸炎是否有治療作用，目前未見相關(guān)報道。本研究旨在探討青藤堿對脂多糖（Lipopolysacchar ide,LPS）誘導后巨噬細胞功能的影響，以及青藤堿能否通過TLR4/NF-κB信號通路抑制炎癥應答。<

2、br>　　方法：(1)向7~9周雄性Balb/C小鼠腹腔注射高壓滅菌的5％淀粉肉湯3天后，腹腔灌洗法分離提取出小鼠腹腔的巨噬細胞，并應用流式細胞術(shù)進行細胞表型鑒定；應用MTT法進行藥物毒性試驗。(2)應用墨汁吞噬法、Transwell技術(shù)、ELISA技術(shù)分別檢測青藤堿對巨噬細胞的吞噬功能、趨化功能以及分泌功能的作用影響。(3)實時定量PCR技術(shù)探討青藤堿對巨噬細胞TLR4、MyD88 mRNA表達水平的影響。(4)細胞免疫熒光技術(shù)檢測青

3、藤堿作用后巨噬細胞核內(nèi)NF-κB表達變化。(5)Western-blot方法檢測青藤堿對巨噬細胞TLR4、MyD88和p-IκB蛋白表達的影響。
　　結(jié)果：(1)經(jīng)過腹腔無菌炎癥聯(lián)合LPS（1μg/ml）刺激后，腹腔灌洗法提取出的細胞經(jīng)流式細胞術(shù)鑒定，純度達95%以上；(2)青藤堿可抑制巨噬細胞的趨化功能以及分泌功能，但對吞噬功能無明顯影響；(3)青藤堿可抑制巨噬細胞TLR4/NF-κB信號通路中關(guān)鍵因子如TLR4、MyD88、p