模擬運(yùn)輸應(yīng)激對大鼠肺臟免疫機(jī)能及TLR4-NF-κB信號通路的影響.pdf

1、現(xiàn)代養(yǎng)殖的集約化程度不斷提高，導(dǎo)致動物的長途運(yùn)輸變得越來越普遍。由于長途運(yùn)輸途中禁食或限飼、噪音、高溫、顛簸、心理壓力等因素的綜合作用，常引起動物產(chǎn)生嚴(yán)重的運(yùn)輸應(yīng)激反應(yīng)，降低了動物的生產(chǎn)性能、免疫機(jī)能和肉品質(zhì)量，造成重大經(jīng)濟(jì)損失以及健康隱患。因此，本研究選用大鼠作為實(shí)驗(yàn)動物，制作大鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型，以研究運(yùn)輸應(yīng)激對動物的肺臟組織及肺泡巨噬細(xì)胞免疫功能的影響。
　　1.將SD大鼠適應(yīng)飼養(yǎng)7d后，于每日9:00-11:00將模擬運(yùn)輸

2、組大鼠置于35℃、60r/min的水平搖床振蕩搖晃，連續(xù)3天，模擬運(yùn)輸過程中的搖晃、高溫、噪音、擁擠等因素，構(gòu)建大鼠運(yùn)輸模型，以觀察模擬運(yùn)輸應(yīng)激對大鼠的臨床癥狀、體重、血清TNF-α、IL-6、皮質(zhì)酮及肺臟組織結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果表明:(1)模擬運(yùn)輸應(yīng)激可引起大鼠精神緊張，行動遲緩，全身發(fā)抖，被毛凌亂，呼吸急促，尿量減少且發(fā)黃，糞便干結(jié)且萎縮。(2)模擬運(yùn)輸應(yīng)激可引起大鼠體重顯著低于對照組(P＜0.05)。(3)模擬運(yùn)輸應(yīng)激可使大鼠血清TN

3、F-α和IL-6濃度升高，且IL-6顯著高于對照組(P＜0.05)。(4)模擬運(yùn)輸應(yīng)激可引起大鼠血清皮質(zhì)酮濃度顯著高于對照組(P＜0.05)。(5)模擬運(yùn)輸應(yīng)激可造成大鼠肺泡不均勻擴(kuò)張，部分肺泡間隔斷裂;小靜脈擴(kuò)張充血，炎癥細(xì)胞浸潤，部分肺泡腔內(nèi)可見水腫。因此，經(jīng)每日35℃、60r/min搖晃兩個小時，連續(xù)3天，可引起大鼠出現(xiàn)嚴(yán)重的運(yùn)輸應(yīng)激及肺組織損傷。
　　2.通過提取大鼠肺臟組織mRNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增后，進(jìn)行相關(guān)免疫指標(biāo)基因擴(kuò)

4、增，檢測IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、TLR4、β-actin的mRNA表達(dá)量，結(jié)果表明:模擬運(yùn)輸應(yīng)激能顯著降低肺臟組織TNF-α、IFN-γ mRNA的表達(dá)量(P＜0.05);同時TLR4、IL-1β、IL-6 mRNA的表達(dá)量略有增加，但與對照組相比并不顯著，說明模擬運(yùn)輸應(yīng)激可抑制大鼠肺臟組織的免疫功能。
　　3.大鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激造模結(jié)束后，采用反復(fù)沖洗法收集大鼠肺泡巨噬細(xì)胞，抽提大鼠肺泡巨噬細(xì)胞總蛋白，Wes

5、tern Blot法檢測NF-κB p65、Phospho-NF-κB p65、IκBα、Actin蛋白表達(dá)量。結(jié)果表明:模擬運(yùn)輸應(yīng)激可提高肺泡巨噬細(xì)胞NF-κB p65磷酸化水平，顯著降低抑制蛋白IκBα的表達(dá)量(P＜0.05)，說明模擬運(yùn)輸應(yīng)激可激活肺泡巨噬細(xì)胞的NF-κB信號通路，將誘導(dǎo)下游前炎性細(xì)胞因子的表達(dá)和分泌。
　　因此，模擬運(yùn)輸應(yīng)激可引起大鼠血液皮質(zhì)酮含量急劇升高，損傷肺臟組織結(jié)構(gòu)，并抑制肺臟免疫機(jī)能，可激活肺泡巨