模擬運輸應激對大鼠肺臟免疫機能及TLR4-NF-κB信號通路的影響.pdf

1、現(xiàn)代養(yǎng)殖的集約化程度不斷提高，導致動物的長途運輸變得越來越普遍。由于長途運輸途中禁食或限飼、噪音、高溫、顛簸、心理壓力等因素的綜合作用，常引起動物產生嚴重的運輸應激反應，降低了動物的生產性能、免疫機能和肉品質量，造成重大經濟損失以及健康隱患。因此，本研究選用大鼠作為實驗動物，制作大鼠模擬運輸應激模型，以研究運輸應激對動物的肺臟組織及肺泡巨噬細胞免疫功能的影響。
　　1.將SD大鼠適應飼養(yǎng)7d后，于每日9:00-11:00將模擬運輸

2、組大鼠置于35℃、60r/min的水平搖床振蕩搖晃，連續(xù)3天，模擬運輸過程中的搖晃、高溫、噪音、擁擠等因素，構建大鼠運輸模型，以觀察模擬運輸應激對大鼠的臨床癥狀、體重、血清TNF-α、IL-6、皮質酮及肺臟組織結構的影響。結果表明:(1)模擬運輸應激可引起大鼠精神緊張，行動遲緩，全身發(fā)抖，被毛凌亂，呼吸急促，尿量減少且發(fā)黃，糞便干結且萎縮。(2)模擬運輸應激可引起大鼠體重顯著低于對照組(P＜0.05)。(3)模擬運輸應激可使大鼠血清TN

3、F-α和IL-6濃度升高，且IL-6顯著高于對照組(P＜0.05)。(4)模擬運輸應激可引起大鼠血清皮質酮濃度顯著高于對照組(P＜0.05)。(5)模擬運輸應激可造成大鼠肺泡不均勻擴張，部分肺泡間隔斷裂;小靜脈擴張充血，炎癥細胞浸潤，部分肺泡腔內可見水腫。因此，經每日35℃、60r/min搖晃兩個小時，連續(xù)3天，可引起大鼠出現(xiàn)嚴重的運輸應激及肺組織損傷。
　　2.通過提取大鼠肺臟組織mRNA，經反轉錄擴增后，進行相關免疫指標基因擴

4、增，檢測IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、TLR4、β-actin的mRNA表達量，結果表明:模擬運輸應激能顯著降低肺臟組織TNF-α、IFN-γ mRNA的表達量(P＜0.05);同時TLR4、IL-1β、IL-6 mRNA的表達量略有增加，但與對照組相比并不顯著，說明模擬運輸應激可抑制大鼠肺臟組織的免疫功能。
　　3.大鼠模擬運輸應激造模結束后，采用反復沖洗法收集大鼠肺泡巨噬細胞，抽提大鼠肺泡巨噬細胞總蛋白，Wes

5、tern Blot法檢測NF-κB p65、Phospho-NF-κB p65、IκBα、Actin蛋白表達量。結果表明:模擬運輸應激可提高肺泡巨噬細胞NF-κB p65磷酸化水平，顯著降低抑制蛋白IκBα的表達量(P＜0.05)，說明模擬運輸應激可激活肺泡巨噬細胞的NF-κB信號通路，將誘導下游前炎性細胞因子的表達和分泌。
　　因此，模擬運輸應激可引起大鼠血液皮質酮含量急劇升高，損傷肺臟組織結構，并抑制肺臟免疫機能，可激活肺泡巨