丹參素對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響.pdf

1、目的：觀察丹參素對(duì)白介素-1β（Iinterleukin-1β，IL-1β）刺激的肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）增殖、凋亡、Ⅲ型膠原合成和分泌，以及磷酸化核因子κB抑制蛋白α（Phosphorylated Inhibitor ofκBα，p-IκBα）、核轉(zhuǎn)錄因子κB蛋白65（Nuclear transcription factor-kappa B proteinum65，NF-κB p65）的影響，探

2、討丹參素抗肝纖維化的分子機(jī)制。 方法：用改良的膠原酶消化-原位循環(huán)灌流-密度梯度離心法提取HSC，α-SMA免疫細(xì)胞化學(xué)染色法鑒定分離HSC。以不同濃度的丹參素作用于IL-1β刺激的HSC，MTT法、AO/EB免疫熒光和AnnexinⅤ-FITC/PI分別檢測(cè)HSC的增殖、凋亡；免疫細(xì)胞化學(xué)、ELISA法、Western Blot分別檢測(cè)Ⅲ型膠原的生成、NF-κB核轉(zhuǎn)位及細(xì)胞漿p-IκBα，、細(xì)胞核NF-κB p65的表達(dá)。

3、 結(jié)果：1.原代分離的HSC細(xì)胞得率3.5×107/只鼠，純度大于95％，存活率大于96％.2.與對(duì)照組相比，IL-1β刺激組HSC增殖明顯增加（P<0.01），凋亡率減低（P<0.05），Ⅲ型膠原的合成和分泌明顯增加（P<0.01）；不同濃度丹參素作用24h后HSC增殖明顯減低（P<0.01），凋亡明顯增加（P<0.01），以早期凋亡為主，Ⅲ型膠原的合成和分泌亦明顯減少（P<0.05或P<0.01），以上作用呈濃度依賴(lài)性（P<0.

4、05或P<0.01），且以0.25mmol/L丹參素作用為著；Western Blot結(jié)果顯示IL-1β刺激組細(xì)胞漿p-IκBα、細(xì)胞核NF-κB p65蛋白表達(dá)明顯增加（P<0.01），細(xì)胞漿p65表達(dá)明顯減低（P<0.05），出現(xiàn)明顯核轉(zhuǎn)位，免疫細(xì)胞化學(xué)顯示細(xì)胞核內(nèi)p65陽(yáng)性染色細(xì)胞增多濃染，提示IL-1β可以誘導(dǎo)HSC的NF-κB活性；不同濃度丹參素組細(xì)胞漿p-IκBα、細(xì)胞核NF-κB p65蛋白表達(dá)明顯減低（P<0.05或P<

5、0.01），上述蛋白減低作用呈濃度依賴(lài)性（P<0，05），0.25mmol/L丹參素組細(xì)胞漿p65蛋白表達(dá)明顯增加（P<0.05），該組細(xì)胞核內(nèi)p65陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)減少淡染，核轉(zhuǎn)位減少，提示丹參素可以濃度依賴(lài)性地抑制HSC的IκBα的磷酸化，減少細(xì)胞核NF-κB p65表達(dá)，阻止NF-κB核轉(zhuǎn)位，從而抑制NF-κB活性。 結(jié)論：1.改良的HSC分離法能分離出高產(chǎn)、高純度的HSC。原代分離的大鼠HSC經(jīng)過(guò)鑒定具有活化HSC的生物學(xué)