脊髓膠質(zhì)細(xì)胞與NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在SMIR術(shù)后持續(xù)性疼痛中的作用.pdf

1、目的:復(fù)制皮膚肌肉切口牽拉(SMIR)術(shù)后持續(xù)性疼痛模型,動態(tài)觀察SMIR術(shù)后持續(xù)性疼痛模型大鼠脊髓背角膠質(zhì)細(xì)胞活化的變化,研究鞘內(nèi)注射(i.t)NF-κB抑制劑PDTC(pyrrolidine dithiocarbamate)對SMIR術(shù)后持續(xù)性疼痛大鼠疼痛行為學(xué)及脊髓TNF-α、IL-1β含量的影響。
　　 方法:(1)36只雄性SD大鼠隨機分為空白對照(control)組、假手術(shù)(sham)組和SMIR模型組,按Flatt

2、ers法制作大鼠SMIR術(shù)后持續(xù)性疼痛模型,于術(shù)前及術(shù)后第1d、3d、7d、12d、22d、32d用機械性縮足反射閾值(MWT)和熱縮足潛伏期(TWL)來評價疼痛行為學(xué)變化,電鏡觀察術(shù)后第12d隱神經(jīng)損傷情況。(2)96只雄性SD大鼠隨機分為sham組和SMIR模型組,分別于假手術(shù)或SMIR術(shù)前及術(shù)后第1d、3d、7d、12d和22d應(yīng)用免疫組織熒光實驗觀察脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖活化情況,Western blotting法觀

3、察脊髓NF-κB p65的表達變化。(3)150只雄性SD大鼠隨機分為sham組和SMIR模型組,按鞘內(nèi)給藥不同將sham組分為sham+i.t生理鹽水組(無菌生理鹽水/10μl i.t,組Ⅰ)和sham+i.tPDTC10g組(PDTC10ng/10μl i.t,組Ⅱ)2個亞組,SMIR模型組分為SMIR+i.t生理鹽水組(無菌生理鹽水/10μl i.t,組Ⅲ),SMIR+i.t PDTC2ng組(PDTC2ng/10μli.t,組Ⅳ

4、)和SMIR+i.t PDTC10ng組(PDTC1Ong/10μl i.t,組Ⅴ)3個亞組,按Yaksh法鞘內(nèi)置管,按Flatters法建立SMIR模型,于術(shù)前及術(shù)后第1d、3d、7d、12d、22d應(yīng)用MWT評價大鼠疼痛行為學(xué)變化,用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbcnt assay,ELISA)觀察大鼠脊髓IL-1β和TNF-α含量的變化。
　　 結(jié)果:(1)疼痛行為學(xué)結(jié)果顯示:與術(shù)前及con

5、trol組比較,SMIR模型組術(shù)后第1d、3d、7d、12d、22d MWT均顯著降低(P＜0.05):而sham組在各時間點MWT無明顯區(qū)別:整個觀察過程中sham組及SMIR模型組大鼠TWL均無顯著變化;與SMIR+i.t生理鹽水組(組Ⅲ)比較,i.t PDTC10ng(組Ⅴ)大鼠在術(shù)后第7d、12d、22d MWT均明顯升高(P＜0.05),而i.t PDTC2ng(組Ⅳ)大鼠MWT無顯著差異;sham+i.t PDTC10ng(

6、組Ⅱ)與sham+i.t生理鹽水組(組Ⅰ)比較,兩者各時間點MWT均無明顯差異。(2)電鏡下觀察隱神經(jīng)損傷結(jié)果顯示:SMIR術(shù)及假手術(shù)后隱神經(jīng)均未出現(xiàn)髓鞘腫脹或脫髓鞘等神經(jīng)損傷現(xiàn)象。(3)免疫熒光化學(xué)結(jié)果顯示:與術(shù)前基礎(chǔ)值比較,術(shù)后各時間點大鼠脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài),sham組無顯著性差異,術(shù)后第3d SMIR模型組大鼠脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量顯著增加,胞體突起增生肥大,呈激活狀態(tài),有顯著性差異(P＜0.01);術(shù)

7、后第3d脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞始增加,于術(shù)后第12d時數(shù)目增加最為顯著(P＜0.01),細(xì)胞呈顯著激活。(4)Western blotting法測定NF-κB p65蛋白表達量變化結(jié)果顯示:與術(shù)前基礎(chǔ)值比較,SMIR術(shù)后第1d大鼠脊髓即出現(xiàn)表達顯著增加(P＜0.01),第3d、7d較術(shù)后第1d有所降低,但仍較術(shù)前增加(P＜0.05);而sham組大鼠各時間點無統(tǒng)計學(xué)意義。(5)ELISA測定脊髓IL-1β和TNF-α含量的變化:與術(shù)前基礎(chǔ)

8、值相比,各時間點中sham組各亞組脊髓IL-1β和1NF-α含量均無顯著性差異,而SMIR模型組各亞組大鼠的脊髓IL-1β和TNF-α含量分別于術(shù)后第3d和第7d始明顯增加(P＜0.01),其中與組Ⅲ與組Ⅳ比較無顯著性差異,而組Ⅴ與組Ⅲ比較脊髓IL-1β和TNF-α含量均明顯較低(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:在本實驗條件下,大鼠SMIR術(shù)后表現(xiàn)出持續(xù)性機械痛覺過敏;脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活與SMIR術(shù)后持續(xù)性疼痛的產(chǎn)