凝血酶通過Perk1-2信號通路參與哮喘大鼠氣道重塑的研究.pdf

1、目的：
　　 哮喘是一種以可逆性氣流阻塞和氣道高反應(yīng)性為特點的氣道慢性炎癥疾病。氣道重塑是其發(fā)病的一個重要病理基礎(chǔ)，包括腺體增生肥大、新生血管形成、上皮下纖維化、氣道平滑肌增厚等。氣道重塑可加重氣道阻塞和氣道高反應(yīng)性，導(dǎo)致肺功能持續(xù)與進行性損害。近年來的研究表明凝血酶(Thrombin)可做為一種促氣道重塑的因子參與哮喘，pERK1/2信號通路可能是其發(fā)生作用的重要通路。本研究通過:
　　 ①用HE染色、PAS染色和馬森

2、染色比較各組大鼠氣道平滑肌增殖、杯狀細(xì)胞增生及膠原沉積的嚴(yán)重程度;
　　 ②采用ELISA檢測肺泡灌洗液的凝血酶含量;
　　 ③采用免疫組化檢測各組TGF-β1的蛋白表達(dá)情況;
　　 ④采用westernblot檢測各組pERK1/2的表達(dá)情況。
　　 探討凝血酶通過pERK1/2信號通路參與哮喘氣道重塑的作用。
　　 方法：
　　 將24只雌性大鼠隨機分為4組，正常對照組（N組）、哮喘模

3、型組（A組）、凝血酶組（T組）、凝血酶+pERK1/2抑制劑PD98059組（P組），每組6只。以卵蛋白(OVA)致敏并吸入激發(fā)制備大鼠哮喘模型。模型組于第1、8天注射卵蛋(1ml/kg)，第15天始霧化2％卵蛋白（現(xiàn)配）每次30分鐘，每周3次，共6周，正常對照組以生理鹽水代替。T組和P組第15天起霧化前先進行凝血酶霧化吸入72u/只，P組霧化后每只腹腔注射PD98059(3mg/kg)[1]，其他各組以生理鹽水代替。造模結(jié)束后，收集大

4、鼠肺泡灌洗液(BALF)，用ELISA測定BALF凝血酶活性。取大鼠肺組織，再分為兩部分，一部分用液氮冷凍，以備westeRNblot，另一部分將標(biāo)本固定于4％多聚甲醛溶液中，以備行石蠟切片。用HE染色、PAS染色、Masson染色檢測氣道重塑情況;采用免疫組化檢測各組TGF-β1的蛋白表達(dá)情況;用westernblot觀察各組大鼠pERK1/2的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.一般情況:N組在激發(fā)時無煩躁不安，呼吸平穩(wěn)

5、，行動靈敏，生活習(xí)性正常，毛色有光澤;A組在激發(fā)時均出現(xiàn)不同程度的煩躁不安、呼吸急促、腹肌抽搐、大小便失禁等癥狀，嚴(yán)重者呼吸減慢或節(jié)律不齊，行動遲緩或俯伏不動。經(jīng)過多次激發(fā)后，哮喘組上述癥狀反而有所減輕，毛色無光澤;T組大鼠呈現(xiàn)于A組一致的癥狀，但程度均重于A組;P組在激發(fā)時出現(xiàn)煩躁不安現(xiàn)象較輕，呼吸增快，偶爾出現(xiàn)大小便失禁狀況，無呼吸減慢或節(jié)律不齊，行動遲緩或俯伏不動現(xiàn)象，毛色正常。
　　 2.氣道重塑情況:N組平滑肌無增厚，

6、無杯狀細(xì)胞增生和膠原纖維沉積;A組平滑肌異常增厚，杯狀細(xì)胞增生多，膠原纖維沉積明顯;T組平滑肌增生、杯狀細(xì)胞增生及膠原纖維沉積情況最嚴(yán)重;P組平滑肌增生程度較輕，杯狀細(xì)胞少，膠原纖維有沉積，但較A組明顯減輕。
　　 3.凝血酶測定結(jié)果:N組凝血酶含量最少，A組凝血酶含量增高，T組最高，說明給藥成功，P組活性與T組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05).
　　 4.TGF-β1的表達(dá):N組表達(dá)水平很低，A組表達(dá)水平很高，與N組相

7、比有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，T組表達(dá)水平最高，與A組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，P組的表達(dá)水平明顯降低，與T組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 5.pERK1/2的表達(dá):N組表達(dá)水平很低，A組表達(dá)水平很高，與N組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，T組表達(dá)水平最高，與A組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，P組的表達(dá)水平明顯降低，與A和T組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.