2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:缺血后處理(ischemic post-conditioning, IPO)能夠激發(fā)機(jī)體內(nèi)源性保護(hù)作用,減輕缺血再灌注(ischemia reperfusion, I/R)后的炎癥反應(yīng),但具體作用機(jī)制目前尚不明確。本課題旨在探討 IPO對局灶性腦缺血再灌注大鼠 Toll樣受體4(Toll-like receptor4, TLR4)- Toll/IL-1受體結(jié)構(gòu)域接頭分子(Toll-interleukin1 receptor dom

2、ain-containing adapter-inducing interferon-b, TRIF)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響,進(jìn)一步闡述IPO的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制,為臨床應(yīng)用IPO治療缺血性卒中提供理論依據(jù)。
  方法:研究選用130只成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠并隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham組)30只,模型組和干預(yù)組各50只,sham組根據(jù)手術(shù)后,模型組和干預(yù)組根據(jù)再灌注后時間點隨機(jī)分為6h、12h、24h、48h和72h5

3、個亞組,sham組每個亞組各6只,模型組和干預(yù)組每個亞組各10只。后兩組采用Zea-longa線栓法建立大鼠大腦中動脈閉塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型。sham組僅手術(shù)暴露頸總動脈及分叉處,不阻斷大腦中動脈。在再灌注開始時即模型建立后2h對干預(yù)組大鼠進(jìn)行IPO處理(即術(shù)后2 h將栓線拔出至頭部位于頸總動脈分叉處,10s后再將栓線置入初始位置10s,如此重復(fù)6次)。對模型組大鼠僅拔出

4、栓線,不給予IPO處理。于再灌注后6h、12h、24h、48h、72h等時間點,采用Menzies法進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride, TTC)染色觀察腦梗死體積;原位末端標(biāo)記法(terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)法檢測缺血側(cè)腦組織細(xì)胞凋

5、亡;實時定量熒光 PCR(Real-time quantitative PCR, qPCR)檢測大鼠缺血側(cè)顳、頂葉皮質(zhì)TLT4-TRIF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的特異性結(jié)構(gòu)分子及關(guān)鍵細(xì)胞因子 TLR4、TRIF、TRIF相關(guān)的接頭分子(TRIF-related adaptor molecule,TRAM)、干擾素調(diào)節(jié)因子3(interferon regulatory factor3, IRF-3)及β干擾素(interferon-β, INF-β)

6、等的mRNA表達(dá);免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry)檢測大鼠缺血側(cè)腦組織中TLR4、TRIF、TRAM、IRF-3及IFN-β等結(jié)構(gòu)分子及關(guān)鍵細(xì)胞因子蛋白陽性細(xì)胞的分布與表達(dá);免疫印跡法(western blotting)定量檢測大鼠缺血側(cè)顳、頂葉皮質(zhì)中TLR4、TRIF、TRAM、IRF-3及IFN-β等結(jié)構(gòu)分子及關(guān)鍵細(xì)胞因子的蛋白表達(dá)。
  結(jié)果:模型組、干預(yù)組大鼠都出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能缺損及缺血側(cè)大腦

7、半球梗死。相比模型組,干預(yù)組大鼠神經(jīng)功能缺損評分得到顯著改善(t=2.963~5.262,P<0.05),腦梗死體積明顯減少(t=3.341~3.875,P<0.05),凋亡細(xì)胞計數(shù)明顯減少(t=2.332~3.643,P<0.05)。模型組和干預(yù)組TLR4、TRIF、TRAM、IRF-3及IFN-βmRNA和蛋白表達(dá)于再灌注6h時已顯著升高。qPCR結(jié)果顯示干預(yù)組TLR4、TRIF、TRAM、IRF-3及 IFN-β mRNA表達(dá)較模

8、型組各對應(yīng)時間點顯著降低(t=2.240~6.587,P<0.05),免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示TLR4、TRIF、TRAM、IRF-3及IFN-β蛋白陽性細(xì)胞主要位于缺血側(cè)額、顳葉皮質(zhì),干預(yù)組陽性細(xì)胞計數(shù)較模型組各對應(yīng)時間點顯著降低(t=2.256~8.180,P<0.05)。Western blotting檢測結(jié)果顯示干預(yù)組 TLR4、TRIF、TRAM、IRF-3及IFN-β蛋白表達(dá)較模型組各對應(yīng)時間點顯著降低(t=2.943~8.

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