雜色云芝菌漆酶的培養(yǎng)純化及其在2，4-二氯苯酚光學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、漆酶（EC1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，廣泛分布于植物，真菌和細(xì)菌中。漆酶能催化降解許多有機(jī)和無機(jī)底物，在工業(yè)應(yīng)用和生物修復(fù)等方面具有廣泛的用途。雜色云芝菌是一種白腐真菌，能分泌胞外漆酶。2，4—二氯苯酚（DCP）是一種毒性較強(qiáng)且難降解的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，其含量檢測(cè)對(duì)環(huán)境保護(hù)及人類健康具有重要意義。 本文對(duì)雜色云芝菌（Coriolus；ersicoto）漆酶的發(fā)酵生產(chǎn)、純化，漆酶的催化特性以及漆酶在2，4—二氯苯酚的

2、生物降解和光學(xué)檢測(cè)方面的應(yīng)用等方面進(jìn)行了研究，主要結(jié)果如下： （1）對(duì)云芝菌產(chǎn)漆酶的主要培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)基組成為：土豆汁20％，葡萄糖20g/L，蛋白胨4.0g/L，KH2PO43.0g/L，MgSO41.5g/L，ZnSO4500mg/L，MnSO4500mg/L，CuSO4160mg/L，ABTS1.0mmol/L，Tween—800.10％。培養(yǎng)基初始pH=5.0，溫度28℃下?lián)u瓶培養(yǎng)13d。

3、 （2）在最優(yōu)條件下培養(yǎng)雜色云芝菌粗酶液酶活達(dá)92.2U/mL，經(jīng)過超濾處理、（NH4）2SO4分級(jí)沉降、Fastflow、G-100過柱等一系列處理純化后，獲得純度較高的漆酶。純化后的液體樣品經(jīng)過冷凍干燥后制漆酶酶粉，其活力為28.4U/mg。該漆酶經(jīng)SDS—PAGE檢測(cè)，分子量約為64.4KD，其同功酶分子量約為35.8KD。 （3）漆酶催化2，2'—連氮—雙（3—乙基苯并噻）—6—磺酸（ABTS）的最適pH為2.0，最佳

4、溫度為55℃。在25℃下催化ABTS的Km值為7.78μM，Vmax為5.11x10—5M·min-1。熱穩(wěn)定性、儲(chǔ)藏穩(wěn)定性良好。Mg2+、Cu2+、Zn2+、Ca2+均對(duì)漆酶活性表現(xiàn)出一定的促進(jìn)作用，而Ag+、Pb2+、Hg2+則表現(xiàn)為抑制，其中Mg+的促進(jìn)作用相對(duì)最強(qiáng)，Ag+表現(xiàn)為抑制最強(qiáng)。 （4）漆酶催化氧化DCP的反應(yīng)為不可逆的氧化還原反應(yīng)，最佳pH值為5.0，最佳溫度為45℃，在最佳催化條件下，漆酶催化氧化DCP反應(yīng)的