蠟蚧輪枝菌固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)孢培養(yǎng)的研究.pdf

1、蠟蚧輪枝菌(Verticilliu.lecanii)是一種重要的生物防治真菌，寄主范圍廣，能寄生蚧類、蚜蟲類、螨類、粉虱，還可寄生鱗翅目的一些害蟲、線蟲等，在生物防治中有重要的應(yīng)用價值。固態(tài)發(fā)酵具有設(shè)備投資少、能耗低、污染少、容易操作等特點，非常適用于蠟蚧輪枝菌的治病活體分生孢子的生產(chǎn)。本論文研究了蠟蚧輪枝菌的常規(guī)固態(tài)發(fā)酵及惰性載體吸附固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)孢：優(yōu)化了吸附的液體培養(yǎng)基和培養(yǎng)參數(shù)，比較了天然及合成惰性載體吸附固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)孢性能的差異，并

2、對PU軟質(zhì)泡沫吸附固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)生的分生孢子進行了抗逆性測定，最終建立了一個可回收利用、便于操作的PU軟質(zhì)泡沫吸附固態(tài)發(fā)酵體系，取得了較好的結(jié)果。
　　 1.對蠟蚧輪枝菌菌株(Verticilliu.lecani.CB.102071)的原始菌種進行了活化培養(yǎng)，研究了PDA平板菌落、菌絲及孢子形態(tài)，最后確定成功的獲得了原始菌株的純培養(yǎng)，并按照真菌的保藏方法進行了保藏；以麥麩為天然固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)進行了常規(guī)的固態(tài)發(fā)酵，優(yōu)化了發(fā)酵參數(shù)，確定了

3、優(yōu)化條件下的蠟蚧輪枝菌菌株(Verticilliu.lecani.CB.102071)的產(chǎn)孢量及周期：最適溫度在23～25℃，最適料水比為5:4，接種濃度為8×107孢子/ml；優(yōu)化后麥麩產(chǎn)孢量約為2.40×109孢子/g干重，培養(yǎng)6～8d達到最大產(chǎn)孢量。
　　 2.以廢棄的甘蔗渣作為惰性載體，進行惰性載體吸附固態(tài)發(fā)酵。先對吸附的液體培養(yǎng)基進行了統(tǒng)計優(yōu)化，獲得了優(yōu)化的培養(yǎng)基配方(g/l)：玉米粉35.79，酵母膏8.69，KH2

4、PO.1.63，K2HPO.0.5，MgSO20.25。然后將常規(guī)的麥麩固態(tài)發(fā)酵和甘蔗渣吸附固態(tài)發(fā)酵的產(chǎn)孢量進行比較：優(yōu)化培養(yǎng)基后，甘蔗渣吸附固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)孢量達到1.08×1010孢子/g干重，比麥麩常規(guī)固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)孢量(2.40×109孢子/g干重)提高約350％。
　　 3.選擇5種惰性載體(甘蔗渣、玉米芯、稻草、PU軟質(zhì)泡沫、活性炭)，研究吸附經(jīng)過優(yōu)化的液體培養(yǎng)液固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)孢性能的差異。比較了產(chǎn)孢量、生長曲線、分生孢子萌發(fā)率：

5、甘蔗渣、PU泡沫吸附固態(tài)發(fā)酵的產(chǎn)孢量最高；甘蔗渣、PU泡沫吸附固態(tài)發(fā)酵的穩(wěn)定期較長，不易衰亡：5種不同的惰性載體固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)生的分生孢子24h的萌發(fā)率都為100％。通過比較分析，最終選擇了可以回收重復利用的PU軟質(zhì)泡沫作為后續(xù)固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)孢的惰性載體。
　　 4.對PU軟質(zhì)泡沫吸附固態(tài)發(fā)酵參數(shù)進行了研究，確定了適宜的產(chǎn)孢子條件及最優(yōu)條件下的產(chǎn)孢量和周期：培養(yǎng)溫度25℃、吸附培養(yǎng)液14ml、培養(yǎng)基初始pH=5.5、接種量16×107孢

6、子、菌種代數(shù)第二代、菌齡為6d；在優(yōu)化條件下，最高產(chǎn)孢量約為2.05×1010孢子/g干重，培養(yǎng)10～13d獲得最高的產(chǎn)孢量。
　　 5.分生孢子的抗逆性研究。對PU軟質(zhì)泡沫吸附固態(tài)發(fā)酵體系生產(chǎn)的分生孢子的耐高溫、低濕度、紫外線輻射進行了研究：溫度從30～40℃時，分生孢子的萌發(fā)率從97～10％；在相對濕90～65％下，分生孢子的萌發(fā)率逐漸在下降，萌發(fā)率從98％～0；在用紫外線輻射從30～300s時，分生孢子的萌發(fā)率不斷在減小，