數(shù)字化可視昆蟲(chóng)之蟲(chóng)體連續(xù)石蠟切片制備技術(shù)研究.pdf

1、沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文數(shù)字化可視昆蟲(chóng)之蟲(chóng)體連續(xù)石蠟切片制備技術(shù)研究姓名：王海舟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)與害蟲(chóng)防治指導(dǎo)教師：王小奇20060501沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要本文針對(duì)昆蟲(chóng)組織結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，以粘蟲(chóng)幼蟲(chóng)為試驗(yàn)材料，從生物組織制片技術(shù)的全過(guò)程出發(fā)，對(duì)每一步驟的操作，都從試劑的選擇、最佳的用量、合理的處理時(shí)間、最適宜的溫度和最優(yōu)的處理方法等方面進(jìn)行了細(xì)致研究，并且在這些研究的基礎(chǔ)上，制成整個(gè)蟲(chóng)體的連續(xù)石蠟切片，又借助顯微數(shù)

2、碼照相機(jī)實(shí)現(xiàn)整個(gè)幼蟲(chóng)內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)的數(shù)字化。具體研究結(jié)果如下：第一，利用天然飼料——玉米幼苗，對(duì)粘蟲(chóng)進(jìn)行散養(yǎng)，在連續(xù)飼養(yǎng)的3代中，卵的孵化率都在90％以上，老熟幼蟲(chóng)化蛹率的平均值為875％，蛹豹羽化率最高為98O％，每頭雌蛾一生累計(jì)產(chǎn)卵量的平均值都在1200粒左右。通過(guò)對(duì)蟲(chóng)體形態(tài)學(xué)指標(biāo)的測(cè)量(幼蟲(chóng)頭殼寬度等)和其它幼蟲(chóng)生物學(xué)特性的觀察，很好的區(qū)分了不同齡期的幼蟲(chóng)，為后續(xù)試驗(yàn)提供了豐富且齡期整齊的蟲(chóng)源。第二從生物組織制片中常用的混合固定液里

3、選出Bouin氏、Bra西l氏和camoy氏等18種固定液，通過(guò)20℃下對(duì)每種固定液的固定時(shí)間、是否導(dǎo)致蟲(chóng)體形變、是否導(dǎo)致蟲(chóng)體硬化及預(yù)切片效果等方面的對(duì)比，發(fā)現(xiàn)Bouin氏、Bragil氏和Cd氏等9秘混合固定液對(duì)粘蟲(chóng)幼蟲(chóng)的固定效果較優(yōu)。對(duì)這9種混合固定液的固定效果，在溫度改變和用量倍數(shù)不同時(shí)的情況進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)：隨環(huán)境溫度的升高，固定速率加快，但與此同時(shí)蟲(chóng)體形變量也加大；溫度改變相同幅度時(shí)，穿透速率較侵的固定液的固定速率提高較快：綜合

4、比較，35℃是固定耗時(shí)相對(duì)較短、形變量相對(duì)較小、均勻程度相對(duì)較高的理想溫度。絕大多數(shù)固定液，在20℃下用量倍數(shù)應(yīng)為蟲(chóng)體的30倍，對(duì)于穿透力較強(qiáng)的固定液可以減少到lO倍。幼蟲(chóng)齡期和蛻皮后時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)這9種較優(yōu)固定液的固定效果有影響。幼蟲(chóng)齡期越高，蟲(chóng)體越大，固定用時(shí)越長(zhǎng)。4齡和5齡的幼蟲(chóng)之間固定時(shí)間相差較小，且形變情況和均勻程度完全一致。但基于后期制片操作和顯微觀察時(shí)對(duì)蟲(chóng)體大小的要求，5齡幼蟲(chóng)更加適合。蛻皮后時(shí)間越久，固定所需時(shí)間越長(zhǎng)，其中“

5、10min以?xún)?nèi)”和“1020min”兩個(gè)時(shí)段內(nèi)的幼蟲(chóng)固定用時(shí)間相等且耗時(shí)最少，所以幼蟲(chóng)蛻皮后20min之內(nèi)為其固定最佳時(shí)段。第三，以水作溶劑的固定液要用流水沖洗，以乙醇作溶劑的固定液要用一定濃度的醇洗滌；以酒精、甲醛、冰醋酸、和氯仿為主要固定試劑的固定液很容易清洗干凈，只需更換2—3次洗滌液即可：而含苦味酸和升汞兩種成分的固定液較難清洗，洗滌耗時(shí)都在10h左右；重鉻酸鉀和鉻酸兩種試劑最難清洗，都須用流水沖洗24h；以水、低濃度酒精(50