2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、為了解microRNA(miRNA)對肝細胞增殖和肝再生的調(diào)節(jié)作用,本文用microRNAs(miRNAs)高通量測序方法檢測大鼠再生肝肝組織中的miRNAs表達差異性發(fā)現(xiàn),microRNA-182(miR-182)等129種miRNAs的表達顯著上調(diào)。用qRT-PCR檢測其中肝再生相關(guān)miRNA在大鼠再生肝中表達變化發(fā)現(xiàn),miR-21,miR-21*,miR-125a, miR-142,miR-143,miR-181c,miR-182

2、,miR-183,miR-191,miR-199a, miR-429等11條miRNAs的表達趨勢與高通量測序結(jié)果基本吻合。結(jié)合文獻報道和預(yù)測的靶基因的功能分析,本實驗室前期選擇以miR-182為研究對象,對其生物學(xué)功能進行體外研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn),用miR-182的模擬物和抑制物轉(zhuǎn)染大鼠正常肝細胞系BRL-3A時,與陰性對照相比,其模擬物顯著促進肝細胞增殖,它的抑制物顯著抑制肝細胞增殖。用雙熒光素酶(Dual-Lucifersae)報告系統(tǒng)

3、檢測表明,miR-182可直接與半胱天冬酶3(caspase3)的mRNA3'端不編碼區(qū)(3'UTR)結(jié)合,說明caspase3是miR-182的靶基因之一,caspase3是執(zhí)行凋亡的蛋白,因此我們推測miR-182通過抑制其靶基因caspase3促進大鼠正常肝細胞系BRL-3A的增殖。
  為進一步檢測miR-182對大鼠肝再生的調(diào)節(jié)作用,我們構(gòu)建了miR-182的過表達質(zhì)粒和干涉質(zhì)粒,用大鼠尾靜脈液壓轉(zhuǎn)基因技術(shù)分別將miR-

4、182的過表達質(zhì)粒microRNA-182-C1和干涉質(zhì)粒microRNA-182-SC1轉(zhuǎn)入大鼠肝臟,首先檢測質(zhì)粒的熒光蛋白的表達動態(tài),其次檢測目的基因miR-182的表達,通過摸索最佳的轉(zhuǎn)基因方式,成功的建立了最佳的轉(zhuǎn)基因模式,檢測肝系數(shù)發(fā)現(xiàn):轉(zhuǎn)入microRNA-182-C1的實驗組在PH72和PH120h時,肝系數(shù)顯著高于對照的肝系數(shù);PH后168h時與對照無顯著差異。而轉(zhuǎn)入microRNA-182-SC1的實驗組在PH后168

5、h時,肝系數(shù)顯著低于對照,表明miR-182的過表達可以促進大鼠肝再生,而當(dāng)干涉miR-182的表達時,大鼠肝再生無法如期完成。用qRT-PCR與Western blot方法檢測miR-182處理后再生肝中的9個與細胞增殖、凋亡、存活相關(guān)基因與蛋白的表達變化發(fā)現(xiàn):在上述再生肝組織中,miR-182對相關(guān)基因發(fā)生改變?yōu)? PH后72h時,caspase3、TNFRS1A、SMAD7、MAPK9上調(diào),WNT4下調(diào)。PH后120h時,casp

6、ase3、TNFRS1A、TGFBR1、WNT4、MAP3K12、SMAD7、MAPK9、MAP2K1上調(diào)。PH后168h時,BCL2、TNFRS1A、TGFBR1、WNT4上調(diào),caspase3、SMAD7、MAPK9下調(diào)。對相關(guān)蛋白變化的影響為-PH后72h時,WNT4、MAPK9、SMAD7、MAP3K12、MAP2K1等蛋白表達上調(diào)。PH后120h時,BCL2、WNT4、MAPK9、SMAD7、MAP3K12、MAP2K1等蛋白

7、表達上調(diào)。PH后168h時,WNT4表達上調(diào),caspase3、TGFBR1、TNFRSF1A等蛋白表達下調(diào),其他無有意義變化。這些結(jié)果提示PH后72-120h通過上調(diào)增殖相關(guān)基因來促進肝再生,168h時的恢復(fù)正常,主要是通過抑制增殖相關(guān)基因和促進凋亡相關(guān)基因的表達來抑制再生肝的異常增殖。
  結(jié)合蛋白質(zhì)組學(xué)研究“大鼠肝再生中肝細胞的蛋白表達變化預(yù)示的細胞增殖活動和凋亡活動”(結(jié)果待發(fā)表)發(fā)現(xiàn),miR-182促進MAPK、SMAD

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