UMSCs對(duì)急性肝衰竭小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的：
　　建立小鼠臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞UMSCs的分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增的方法；確定分離、培養(yǎng)的細(xì)胞能夠穩(wěn)定傳代，有很強(qiáng)的增殖活性，為以后的細(xì)胞移植創(chuàng)造了較好的前提條件。采用四氯化碳建立小鼠急性肝衰竭模型，并觀察小鼠的一般狀況；了解 UMSCs移植對(duì)急性肝衰竭的療效，包括肝功能和肝組織病理變化；觀察移植前后血清中IL-4和IFN-g含量變化；檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)肝組織中PD-1 mRNA的水平變化。
　　方法：
　　應(yīng)用雙酶消化法消

2、化C57BL/6孕鼠臍帶組織，行貼壁和傳代培養(yǎng)，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和觀察細(xì)胞形態(tài)。用四氯化碳(CCl4)溶于橄欖油,配成濃度為50%的四氯化碳，予3ml/kg分組腹腔注射給藥。小鼠分為三組，實(shí)驗(yàn)組、移植對(duì)照組和空白對(duì)照組，分別在7d、14d、21d檢測(cè)肝功能。血清IL-4和IFN-g含量采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定。取不同時(shí)間點(diǎn)的肝組織行石蠟切片和HE染色，觀察肝臟病理變化情況。RT-PCR檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)肝組織中PD-1 mRN

3、A的水平表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.以膠原酶和胰酶兩步消化法對(duì)小鼠UMSCs進(jìn)行了分離培養(yǎng)，獲得了成功。兩周之后，主要為長(zhǎng)梭形或扁平形的成纖維樣細(xì)胞，細(xì)胞呈束狀密集平行排列。經(jīng)過(guò)多次消化、傳代后，細(xì)胞形態(tài)仍為長(zhǎng)梭狀，且形態(tài)更加均勻，有很強(qiáng)的增殖活性。群體倍增時(shí)間為24h左右。2.成功建立小鼠急性肝衰竭模型。3.移植組小鼠肝功能和造模組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。4.移植UMSCs1w、2w、3w后各時(shí)間點(diǎn)IL-

4、4和IFN-g濃度和造模組比較，IL-4呈上升趨勢(shì)，而 IFN-g呈下降趨勢(shì)。5.UMSCs可改善急性肝衰竭小鼠的炎癥浸潤(rùn)，有利于肝小葉結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常。6.在正常的小鼠肝臟組織中，PD-1有一定的表達(dá)，造模組12h、24 h、48h PD-1和正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。移植UMSCs后24h、48h PD-1和正常組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，和造模組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論