靈芝發(fā)酵條件優(yōu)化及其對免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用.pdf

1、試驗通過在枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基中梯度添加靈芝液，馴化枯草芽孢桿菌，篩選其適宜枯草芽孢桿菌生長繁殖的濃度。用馴化后的枯草芽孢桿菌發(fā)酵靈芝，將胞外多糖的含量作為考察指標，選用接菌量、攪拌轉(zhuǎn)速、初始pH、發(fā)酵溫度及發(fā)酵時間五個因素進行單因素考察優(yōu)化發(fā)酵條件。利用掃描電鏡觀察靈芝發(fā)酵后粉末結(jié)構(gòu)的變化。利用Bruker Tensor27紅外光譜儀掃描發(fā)酵靈芝多糖和普通靈芝多糖，觀察吸收峰。選用小白鼠80只，隨機分為8組，每組10只，除空白對照組外，

2、其余各組連續(xù)3天腹腔注射80mg/kg的環(huán)磷酰胺制備免疫抑制小鼠模型，第4天開始，兩種靈芝多糖高、中、低劑量組分別給小鼠灌服200、100、50mg/(kg·d)相應(yīng)的多糖溶液，空白對照組、試驗對照組則都灌服相應(yīng)體積的生理鹽水。每天一次，劑量為0.1mL/10g，連續(xù)灌服7d。并于第10d末次給藥24h后，處死小鼠，檢測小鼠臟器指數(shù)，采用ELISA法測定IL-2、TNF-α、IL-4、IFN-γ、 IgG、IgM和IgA的含量;利用紫外

3、分光光度計檢測GSH-Px、SOD、T-AOC、CAT和MDA的含量。
　　實驗結(jié)果:在菌體液體馴化培養(yǎng)基中添加14％的靈芝液，枯草芽孢桿菌可穩(wěn)定生長繁殖，當(dāng)靈芝液濃度為16％時，枯草芽孢桿菌不能穩(wěn)定生長。枯草芽孢桿菌發(fā)酵靈芝產(chǎn)胞外多糖的最佳條件分別為接菌量為4％，攪拌轉(zhuǎn)速為180r/min，初始pH為6.0，發(fā)酵溫度為30℃及發(fā)酵時間為16h。通過掃描電鏡的觀察發(fā)現(xiàn)發(fā)酵靈芝粉末菌肉菌絲結(jié)構(gòu)解體、破碎成纖維狀，并以分散的菌絲片段存

4、在;而在對照樣品中，仍然存在相當(dāng)多的菌肉菌絲組織，其結(jié)構(gòu)尚未完全破壞，保持著一定的完整性。經(jīng)過紅外光譜儀掃描后發(fā)現(xiàn)兩種靈芝多糖大部分的吸收峰在相近的波數(shù)范圍內(nèi)，但發(fā)酵靈芝多糖在3000～2800cm-1波數(shù)范圍內(nèi)有吸收峰，而普通靈芝多糖在此范圍內(nèi)幾乎見不到C-H鍵伸縮振動引起的吸收峰，而且發(fā)酵后靈芝多糖的紅外光譜圖譜帶無論從位置、數(shù)量，還是形狀都有一定程度的改變。與空白對照組相比，試驗對照組的胸腺和脾臟指數(shù)極顯著降低，血清中IL-2、T

5、NF-α、 IL-4、IFN-γ、IgG、IgM和IgA及肝組織中GSH-Px、 SOD、T-AOC、CAT的含量都極顯著下降，而MDA的含量則極顯著增加(P＜0.01)。與試驗對照組相比，發(fā)酵靈芝多糖低劑量組對免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)有顯著性提高(P＜0.05)，發(fā)酵靈芝多糖中、高劑量組對免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)則極顯著性提高（P＜0.01)。同時，發(fā)酵靈芝多糖各劑量組對免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)，血清IL-2、TNF-α、IL-4、IFN-

6、γ、IgG、IgM和IgA的含量及肝臟組織中GSH-Px、SOD、T-AOC、CAT都極顯著提高(P＜0.01)，而MDA的含量則極顯著降低(P＜0.01)。與普通靈芝多糖相比，發(fā)酵靈芝多糖的免疫調(diào)節(jié)和抗氧化功能的效果均高于普通靈芝多糖。
　　結(jié)論:將馴化后的枯草芽孢桿菌發(fā)酵靈芝，通過五個單因素條件的篩選，優(yōu)化出產(chǎn)胞外多糖的最佳發(fā)酵工藝。靈芝粉末經(jīng)過發(fā)酵后菌肉菌絲結(jié)構(gòu)解體，大部分以菌絲片段形式存在，無法保持完整的形態(tài)結(jié)構(gòu)。靈芝經(jīng)過