人源乳酸菌篩選及其對小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、免疫系統(tǒng)是人體自身的防御系統(tǒng)，可以識別和消滅外來侵入機(jī)體的任何異物，也可處理衰老、死亡等自身細(xì)胞。免疫低下是免疫系統(tǒng)失衡的直接表現(xiàn)，是機(jī)體的一種亞健康狀態(tài)，而乳酸菌及其相關(guān)制品具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力等生理功能。本研究以分離自廣西巴馬長壽人群腸道中的乳酸菌為研究對象，通過體外試驗篩選出耐受性和黏附性較高的乳酸菌，以脾淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為靶細(xì)胞從體外水平研究其對細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)活性，并通過小鼠免疫低下模型探討其在體內(nèi)對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)效應(yīng)。主要研究結(jié)

2、果如下:
　　1.人源乳酸菌腸道耐受性及黏附能力體外研究。通過測定分離得到的乳酸菌在不同pH的人工胃液、人工腸液及不同膽鹽濃度培養(yǎng)基中的存活率以及對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌的抑制能力來篩選耐受性及抑菌活性較強(qiáng)的乳酸菌，然后研究它們的表面疏水性、自聚合能力及黏附能力。結(jié)果表明，從樣品中分離得到119株菌株，將71株初步鑒定為乳酸菌，其中43株乳酸菌的凝乳特性良好、產(chǎn)酸速率中等、后酸化弱;21株乳酸菌在pH為2.0的人工胃液

3、和人工腸液培養(yǎng)3h存活率均大于20％，在膽鹽濃度為0.5％培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h存活率大于10％;進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，共有12株高黏附性乳酸菌表面疏水性大于25％，自聚合百分率大于25％，每個細(xì)胞平均黏附菌數(shù)大于8個;對表面疏水性、自聚合能力及黏附性進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，表面疏水性與黏附性呈顯著正相關(guān)，自聚合能力與黏附性呈顯著正相關(guān)。
　　2.乳酸菌菌體對免疫細(xì)胞活性影響的體外研究。通過測定乳酸菌菌體外誘導(dǎo)免疫細(xì)胞增殖率、吞噬中性紅能力、分

4、泌IL-2、TNF-α及NO水平來研究其對免疫細(xì)胞活性的影響。結(jié)果表明，12株乳酸菌中對脾淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)增殖率均大于40％的菌株有LV108、PW1、RBM7和XJH301，其中菌株LV108對細(xì)胞誘導(dǎo)作用最強(qiáng);刺激脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2含量均大于30.00ng/L的菌株有LV108、T2及XJH301;刺激脾淋巴細(xì)胞分泌TNF-α含量均大于34.40ng/L的菌株有LV108、N4、XJH301和W9。對巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)增殖率均大于40％的

5、菌株有LV108、N4、XJH301和Z9;菌株LV108、PW4和XJH301誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞吞噬中性紅能力與陽性對照組沒有顯著性差異;刺激巨噬細(xì)胞分泌NO含量均大于6.80μmol/L的菌株有LV108、Q3和XJH301。通過研究乳酸菌菌體對免疫細(xì)胞活性的影響發(fā)現(xiàn)，菌株LV108和XJH301對免疫細(xì)胞刺激效果及分泌免疫活性物質(zhì)高于其它菌株，因而對這2株乳酸菌體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行進(jìn)一步研究。
　　3.乳酸菌分離株鑒定及耐藥性和益

6、生特性分析。通過測定乳酸菌對慶大霉素、阿米卡星、萬古霉素等13種抗生素的藥敏性、對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和沙門氏菌三種致病菌的抑菌性及抗氧化能力來研究乳酸菌的體外功能特性。結(jié)果表明，菌株LV108和XJH301的耐藥譜相對較窄，均對新霉素、磺胺異惡唑及鏈霉素具有耐受性，均對頭孢哌酮及頭孢曲松中度敏感;均對阿米卡星、萬古霉素、卡那霉素及紅霉素敏感。菌株LV108對3種致病菌抑菌圈直徑分別為21.40±1.53mm、17.50±1.24m

7、m及19.50±1.84mm;菌株XJH301對3種致病菌抑菌圈直徑分別為18.33±1.53mm、17.07±0.87mm及20.17±0.71mm。菌株LV108和XJH301發(fā)酵液對羥自由基清除率均大于53.00％;對DPPH自由基清除率均大于62.00％;還原能力均大于2.0。對篩選出的免疫調(diào)節(jié)性能較強(qiáng)、益生特性較好的菌株LV108和XJH301進(jìn)行API鑒定和16S rDNA序列鑒定發(fā)現(xiàn)，菌株LV108為鼠李糖乳桿菌（Lact

8、obacillus rhamnosus）、菌株XJH301為短雙歧桿菌（Bifidobacterium breve）。
　　4.乳酸菌對免疫低下小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的研究。通過腹腔注射環(huán)磷酰胺來建立免疫低下小鼠模型，以左旋咪（硅）藥物為陽性對照，研究乳酸菌菌懸液及其發(fā)酵乳對機(jī)體免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)效應(yīng)。對各組小鼠體重增長速率、臟器指數(shù)、血清免疫分子分泌水平進(jìn)行了比較分析，同時對各組小鼠血清溶血素含量、耳腫脹度、脾淋巴細(xì)胞增值率（特異性免疫功

9、能指標(biāo)）以及巨噬細(xì)胞吞噬活性（非特異性免疫功能指標(biāo)）進(jìn)行了測定。結(jié)果表明，采用連續(xù)3天皮下注射80mg/kg的環(huán)磷酰胺方法成功的建立了免疫低下小鼠模型，干預(yù)組臟器指數(shù)、溶血素含量、耳腫脹度等指標(biāo)顯著高于模型組;通過乳酸菌干預(yù)4周后，發(fā)現(xiàn)LV108和XJH301菌懸液組及其發(fā)酵乳組小鼠體重增長幅度顯著高于模型組;其血清IL-2含量分別為163.11ng/L、167.41ng/L、160.11 ng/L、166.18ng/L，其血清IgG含