豬源益生乳酸菌的篩選及其菌劑制備技術(shù)研究.pdf

1、為研制出高活性飼用益生菌制劑替代仔豬飼料中添加的抗生素。本研究從健壯仔豬糞便中篩選出具有較強(qiáng)產(chǎn)酸能力的乳酸菌，并對(duì)菌株生長(zhǎng)特性，耐受動(dòng)物消化道逆環(huán)境能力、抑制病原菌、粘附小腸上皮細(xì)胞等益生特性及菌劑制備工藝進(jìn)行研究。主要研究成果如下：
　?。?）豬源乳酸菌的篩選及鑒定。通過(guò)添加溴甲酚紫指示劑的MRS進(jìn)行初次篩選，得到26株疑似目標(biāo)菌株；經(jīng)過(guò)耐酸耐膽鹽復(fù)篩，得到7株對(duì)低pH和高濃度膽鹽具有一定耐受能力的菌株。通過(guò)生理生化、分子生物等

2、手段將其中耐酸耐膽鹽性能最好的兩株菌分別鑒定為植物乳桿菌NCU156和戊糖片球菌NCU301。
　　（2）NCU156生長(zhǎng)特性。NCU156能夠產(chǎn)生大量的乳酸使培養(yǎng)基pH降低至3.6左右。0-2 h是生長(zhǎng)延滯期，2-12 h是對(duì)數(shù)期，12-32 h是穩(wěn)定期，32 h以后為衰亡期。
　?。?）NCU156動(dòng)物胃腸道環(huán)境耐受性。NCU156在pH2.5的MRS中4 h存活率為87.31％。在3 g/L的膽鹽濃度下4 h存活率仍有

3、41.88%；在模擬胃液中處理4 h菌數(shù)稍有增加（P＞0.05），接入模擬腸液后10 h活菌數(shù)在108 CFU/mL以上，說(shuō)明NCU156能夠順利達(dá)到動(dòng)物腸道。
　　（4）NCU156粘附性能。NCU156粘附能力在一定范圍內(nèi)呈菌濃度和Ca2＋濃度依賴(lài)性，在作用2 h粘附達(dá)到平衡，在穩(wěn)定期中期（20 h）粘附最穩(wěn)定；對(duì)病原菌粘附的抑制作用中，排斥性的粘附抑制作用效果最強(qiáng)，其次是競(jìng)爭(zhēng)性的粘附抑制，最后是置換性的粘附抑制。
　　

4、（5）NCU156抑菌性能。NCU156對(duì)常見(jiàn)7株致病菌的抑菌性研究表明，對(duì)銅綠假單胞菌抑制效果最好，抑菌圈的直徑達(dá)23 mm以上，菌體沒(méi)有抑菌性；發(fā)酵液抑菌性不受高溫、過(guò)氧化性酶、蛋白酶等處理方式的影響，故其抑菌性可能主要來(lái)源于所產(chǎn)生的乳酸； NCU156藥敏結(jié)果顯示其對(duì)四環(huán)素類(lèi)、青霉素類(lèi)抗生素敏感，對(duì)頭孢類(lèi)、糖肽類(lèi)、喹諾酮類(lèi)抗生素均耐藥。
　?。?）NCU156菌劑制備工藝優(yōu)化。以活菌數(shù)為指標(biāo)通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和BOX-Behnk